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编号:547451
等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的研究
http://www.100md.com 2023年6月7日 食品安全导刊 2023年第12期
荧光法,1材料与方法,1病原菌,2主要仪器,3方法,2结果与分析,1引物设计,2等温扩增荧光法,3常规PCR检测沙门氏菌的结果,3结论与讨论
     梁振瑞,张 薇,许绍坤,李鲜鲜,冯 红,自武全

    (云南瑞栢泰生物科技有限公司,云南昆明 650000)

    沙门氏菌是革兰氏阴性菌,属于肠杆菌科,是常见的食源性致病菌,目前已知血清型有2 500 个以上[1-3]。人一旦摄入了含有大量沙门氏菌的食品,就会引起细菌性感染,进而导致食物中毒、急性肠胃炎等疾病,因此,沙门氏菌检测是各个国家检验机构的必检项目之一[4]。目前,检测沙门氏菌的方法有很多,如酶联免疫法[5]、PCR 法等[6],但这些检测方法都存在检测过程烦琐、检测周期长的弊端[7]。近年来,随着新技术的不断发展与完善,以分子生物学技术为基础的分析检测方法迅速发展[8-9]。因此,建立一种快速简便的沙门氏菌检测方法具有重要意义。

    等温扩增荧光技术是核酸等温扩增和荧光技术结合的新型核酸诊断POCT 技术,针对目的片段设计4 ~6 条特异引物。使用DNA 聚合酶,通过添加荧光染料实时监控整个扩增过程,分析实时扩增曲线和产物熔解曲线对产物进行定性或半定量。等温扩增荧光技术对温度精准度要求低,只需要恒定温度就能完成扩增反应,不需要预先进行双链DNA 的变性,大大缩短了反应时间。由于该方法具有操作简单、反应快速、灵敏度和特异性强等优势,已被广泛用于病原体的快速检测。

    1 材料与方法

    1.1 病原菌

    沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏杆菌、恶臭假单胞菌(简称:SM、DC、JP、ZH、EC)由云南国际旅行卫生保健中心(昆明海关口岸门诊部)提供 ......

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