杨 滴

    (大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁大连 116600)

    大肠埃希氏菌O157:H7(E.coliO157:H7)是肠出血型大肠埃希氏菌的一种主要血清型，是一种危害严重的食源性病原微生物，其广泛分布于自然界，严重威胁公众健康[1-3]。近年来，由致病性微生物引起的食品污染事件呈上升趋势。肉及肉制品营养丰富，可满足人们的需求，但极易滋生各类有害细菌[4]。相关调查发现，肉及肉制品受致病菌的污染最为严重，而E.coliO157:H7 污染占比很大[5]。

    现阶段E.coliO157:H7 的主要检验方法为微生物分离培养鉴定，其过程烦琐、费时费力、易产生假阳性[6]。基于TaqMan 探针的实时荧光PCR 技术是微生物检验的主要辅助手段，具有高效、特异、精准的优点。本研究旨在以E.coliO157:H7 菌体抗原基因rfbE为对象，研发一种肉制品中E.coliO157:H7实时PCR 检测方法，为肉制品中E.coliO157:H7 的检测提供技术支持，为市场监管提供保障。

    1 材料与方法

    1.1 菌株

    本研究使用11 株标准菌株，均购于CICC。所有标准菌株信息见表1。

    表1 标准菌株信息

    1.2 主要试剂

    营养肉汤培养基；细菌基因组DNA 提取试剂盒；Premix Ex Taq PCR 试剂盒 ......