朱祥 马圭 祁卫东 蒋鹏程 范钰

    (江苏大学附属人民医院肿瘤研究所 江苏镇江 212002)

    Cripto-1基因最初是通过克隆人畸胎瘤细胞系中的互补DNA文库得到，故相应地命名为畸胎瘤衍生生长因子-1(teratocarcinoma-derived growth factor-1，TDGF1)，定位在人类染色体3p21.3[1]，编码cripto蛋白，故一般称为Cr-1基因。研究发现，Cr-1基因在许多恶性实体瘤如结直肠癌、胃癌、胰腺癌、阴茎癌、膀胱癌及前列腺癌等中均呈过度表达，而它在正常组织中都不表达或低表达[2，3]。有研究发现，Cr-1基因与某些肿瘤如结直肠癌[4～8]侵袭有关。但国内目前尚无关于此基因在结直肠癌细胞侵袭方面的研究。

    本课题组借助于RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术，以化学合成Cr-1基因小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转染处理结直肠癌SW480细胞，观察了Cr-1基因siRNA转染对癌细胞侵袭的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂 人结直肠癌SW480细胞，本院组织生物标本库冻存。Cr-1抗体购自Santa Cruz公司。TRIzol，RNase inhibitor，逆转录酶SSRTⅡ，Taq酶和转染试剂Oligofectamine购自Invitrogen公司。

    1.1.2 siRNA序列 根据Cr-1基因mRNA序列特点，设计合成了6个siRNA。另外，设计了一个错配 siRNA(正义 链：5＇-UUCUCCGAACGUGUCACGUTdTd-3 ＇； 反 义 链： 5 ＇-ACGUGACACGUUCGGAGAATdTdT-3＇)作为对 照。所有siRNA均由美国Dharmacon公司采用化学合成方法合成。Cripto-1siRNA序列见表1。

    表1 Cripto-1siRNA 序列

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及转染处理 人结直肠癌SW480细胞在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液、37℃、5%CO2、饱和湿度环境的条件下培养 ......