曾建成 黄玉梅 陈凤玲

    (深圳市宝安区西乡人民医院肛肠外科 广东深圳 518102)

    神经丛素(Plexins)是一种跨膜蛋白，是信号素(Semaphorins)家族的受体。Plexin Al是Plexins家族的一种亚型，具有多项潜在功能。以往对Plexin Al的研究主要集中在神经系统的发生和发展方面，近年来研究发现Plexin Al在心血管形成、免疫反应、上皮细胞生长以及肿瘤生长中都发挥着重要的作用[1～3]。本研究将Plexin A1的研究引入了消化道常见的恶性肿瘤直肠癌中，通过RT-PCR和免疫组织化学方法检测直肠癌中Plexin A1的表达，探讨Plexin A1的表达与临床病理因素之间的关系，为直肠癌的治疗和诊断提供新的思路。

    1 材料和方法

    1.1 材料 收集广东医学院附属医院及西乡人民医院直肠癌患者外科手术切除标本67例，无淋巴结转移42例，有淋巴结转移25例。所有的患者手术前均未接受过任何放疗、化疗，并且经病理组织学证实。患者年龄分布在36～80岁之间，平均57±6岁，其中男39例，女28例。根据Duckes分期：A期16例，B期26例，C、D期25例。另取相应的癌旁组织(肿瘤边缘5cm以上的无肿瘤组织)45例作为对照组。所有患者均知情同意。

    1.2 主要试剂 RT-PCR引物由上海生工生物公司设计并合成。逆转录PCR试剂盒和普通PCR试剂盒购自TAKARA公司。Plexin A1多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，抗体工作浓度为1∶50，采用福州迈新公司免疫组化检测试剂盒。

    1.3 方法

    1.3.1 半定量RT-PCR (1)提取总RNA及逆转录：新鲜组织离体后，用Trizol法提取总RNA，溶于20μL DEP水中，使用核酸蛋白测定仪检测总RNA浓度。逆转录体系为20μL，加入1.5μg总RNA，用逆转录试剂盒，按照说明书操作步骤进行逆转录反应。(2)PCR扩增及电泳：取1μL逆转录产物作为模板，使用PCR扩增试剂盒 ......