鲁明良 何瑾 叶卫东

    (1 中国人民解放军第一一七医院肛肠外科 310004；2 萧山第四人民医院普外科)

    结直肠癌是一种严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤之一[1]。世界范围的流行病学调查资料表明，在各类恶性肿瘤中，结直肠癌的发病率排在第三位，年度新增病例高达57万。随着社会经济的发展、现代化生产规模的扩大，人类生活水平的改善以及由此产生的生态和生理性负效应，结直肠癌的发病率将呈现逐年增高的趋势。结直肠癌的发生是结肠黏膜上皮受遗传和环境等多种因素作用导致多基因改变的结果，其最早变化是隐窝细胞生长失调呈高增生状态，随着细胞的增生、堆积，隐窝增生区的上移，可逐渐形成向肠腔突出的肿块(息肉)，肿瘤细胞浸润基底膜便发展为癌，进一步发展可出现转移。从正常结直肠黏膜-结直肠腺瘤-结直肠腺癌这一癌变过程中，其许多癌基因和抑癌基因发生改变，其中黏蛋白MUC1和MUC2出现质和量的异常。本文主要致力于黏蛋白MUC1、MUC2与结直肠癌的相关性的研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本来源 结直肠腺瘤组织20例及原发性结直肠癌60例均随机选自本院及全军肛肠研究所2000年1月至2008年12月手术切除并经病理证实的石蜡包埋组织标本，所有病例均有完整的随访资料。60例结直肠癌中，男33例，女27例；年龄20～75岁，平均52.88岁；发生部位结肠19例，直肠41例；根据1989年WHO肿瘤组织学分类：高、中、低分化各20例；侵及肌层以上者34例，侵及浆膜和/或浆膜以外器官26例；有淋巴结转移者23例，无淋巴结转移者37例；Dukes分期中A期19例，B期13例，C期23例,D期5例；生存期大于5年者32例，小于5年者28例。每例标本均经HE切片再次复查认定。所有的标本行约4μm厚的连续切片4张，分别做HE染色，免疫组化MUC1、MUC2染色。

    1.1.2 主要试剂 鼠抗人MUC1单克隆抗体浓缩液(克隆号Ma695),鼠抗人MUC2单克隆抗体浓缩液(克隆号Ccp58)及SP免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒均为北京中山生物技术公司产品。

    1.1.3 主要仪器 石蜡切片机、烤片箱、微波炉、37℃水浴箱，光学显微镜等。

    1.2 方法

    1.2.1 H-E染色

    1.2.2 免疫组化染色 (1)载玻片处理：载玻片清洗干净后，放入70%乙醇-1%盐酸浸泡48 h，蒸馏水冲洗，烤箱内烘干。10%多聚赖氨酸涂片，风干过夜。(2)石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2室温孵育5～10 min ......