朱小宝 田小林 宋永攀 庞凌坤

    (桂林医学院 广西桂林 541001)

    结直肠癌的发生与发展涉及多基因、多途径的改变。筛选特异敏感的分子指标用于结直肠癌的人群筛查，将对早期诊断和治疗结直肠癌，降低结直肠癌罹患及减少患者死亡、延长生存时间均有重要意义。随着对人类基因组不断深入的研究,生物性致癌因子尤其是病毒性致癌因子在诱导人类肿瘤发生与发展过程中起到激活作用。近年诸多家研究证实,JCV与人类肿瘤如脑肿瘤、胃癌、食管癌、肺癌、前列腺癌中均已证实上述结论[1～3]。但对于JCV在结肠癌发生发展中的作用仍没有统一的认识。有研究报道人体细胞是JCV的半容许性细胞,即JCV存在于人结直肠腺癌组织中,但是否具有致癌性及其机理国外已有相关报道,国内罕有JCV在结直肠腺癌中表达及相关性深入的研究。β-catenin与肿瘤的发生发展、侵袭转移及患者预后不良关系密切。胃癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌和乳腺癌等癌症中均已证实上述结论[4～6]，即Wnt/β-catenin正常表达的罹癌患者，其预后要优于那些Wnt/β-catenin表达上调的病人。这就提示Wnt/β-catenin 表达可作患者预后预测的生物标志物和早期诊断的重要候选生物分子指标。本研究通过免疫组织化学及RT-PCR技术，结直肠腺癌组织JCV早期基因编码产物大T抗原(T-Ag)与β-catenin在人结直肠腺癌组织中的关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本 收集笔者所在单位2010年5月至2011年8月期间经外科手术切除的结直肠腺癌(Colorectal carcinoma,CRC)组织标本65例, 其中男42例，女23例，患者术前未做过化疗和放疗；20例结直肠非肿瘤标本多为肠梗阻标本，所有标本均由两位以上病理医师确诊。按病理组织学分级，其中高分化17例，中分化12例，低分化36例。按TNM分期，Ⅰ期6例，Ⅱ期11例，Ⅲ期39例，Ⅳ期9例。非癌患者为肠梗阻正常肠黏膜20例为正常对照。

    1.1.2 试剂 鼠抗人单克隆抗体SV40 T-Ag及β-catenin购自美国Sant Cruz公司,柠檬酸抗原修复液、S-p越敏免疫组化染色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。PCR引物，由Invitrogen英潍捷基(上海)贸易有限公司合成；Trizol(美国Invitrogen 公司)；逆转录试剂盒，美国Fermentas公司，PCR试剂盒，北京天泽基因科技有限公司。

    1.2 免疫组织化 S-P法操作严格按照试剂盒说明进行 ......