周联明 张学利 单远洲 张吉发 朱光辉

    (上海交通大学附属六院南院上海奉贤区中心医院普外科 上海 201499)

    结肠癌是常见消化道恶性肿瘤，临床治疗以手术为主，辅以结合放疗和化疗[1]，由于肿瘤干细胞对化疗不敏感而容易造成复发。基因治疗作为一种新兴的治疗方法，其靶向性与安全性正逐渐引起人们的关注，极有可能成为未来肿瘤治疗的发展趋势。细胞凋亡在结肠癌的发生和发展中扮演重要的角色，与凋亡有关的基因或蛋白已成为肿瘤治疗的研究热点[2]。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosis factor related apoptosis-inducingligand，TRAIL) 能选择性介导肿瘤细胞凋亡而对正常组织和细胞无损伤，其抗肿瘤的优势已受到研究者的重视[3]。人端粒酶逆转 录酶 (human telmoerase reserse transcriptase，hTERT)是人端粒酶活性的中心，是最重要、最普遍的肿瘤特异性的生化标志之一[4]。端粒酶的活化是细胞永生化和癌变的重要因素，由于端粒酶启动子仅能在肿瘤细胞中启动基因转录而在正常细胞中不启动，因此本研究通过观察hTERT启动子驱动TRAIL基因体外对结肠癌细胞的抑制作用，以期为结肠癌的靶向基因治疗提供理论依据，现报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料 结肠癌HT-29细胞购于中科院细胞所。Pshuttle载体和重组质粒pcDNA3.1+-GFP由本实验室构建。RPMI1640购自Gibco公司；胎牛血清(FBS)、碘化丙啶(PI)、LipofectamineTM2000 和Trizol试剂购自美国 Invitrogen公司；PI试剂盒，MTT、逆转录酶、RNA酶购自sigma；胰蛋白酶、DMSO购自百灵威。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养及传代 将人结肠癌细胞HT-29复苏后，置于在RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清、100U/mL链霉素、100U/mL青霉素)，在温度37℃、CO2体积5%(v/v)的细胞培养箱中培养，取对数生长期细胞进行试验。

    1.2.2 细胞转染及检测 取对数生长期HT-29细胞消化为单细胞悬液，以4×105个/mL接种至6孔板，24 h后使用脂质体Lifopect进行瞬时转染，操作严格按照LipofectamineTM2000试剂说明书进行。本实验设未转染的空白对照组；转染pshuttle的空白质粒组，转染pshuttle-TRAI重组质粒组以及转染pshuttle-hTERT-TRAIL重组质粒组 ......