龚立刚 王梦萍 刘文俊 李 菲 任 斌

    (1武汉市第八医院病理科 湖北武汉 430010；2武汉市汉口医院病理科 湖北武汉 430012)

    结直肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，根据世界卫生组织(WHO)报道，结直肠癌是男性第三位和女性第二位常见的恶性肿瘤[1]。结直肠癌肝转移是影响患者预后的主要因素之一，手术切除是其主要的有效干预手段，但未达20%的患者可有指征接受根治性肝切除术，大部分仅能进行姑息性治疗，其5年生存率低于 10%[2]。 斯钙素 2 (Stanniocalcin 2，STC2)是一种糖蛋白分泌激素，在诸如乳腺癌、卵巢癌、肝癌等多种恶性肿瘤中发现其明显高表达，且其高表达与肿瘤大小有关[3]。因此本研究利用慢病毒载体将shRNA转染入HCT116细胞以沉默STC2，构建沉默STC2的HCT116细胞系，建立结肠癌肝转移动物模型，分析STC2在结肠癌肝转移中的作用，现报告如下。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 6～8周龄的雄性 Balb/c裸鼠24只，体重 16～20 g，购自武汉市第八医院动物实验中心，均放置于SPF3级实验室饲养。

    1.1.2 实验细胞 人结肠癌细胞HCT116，由武汉市第八医院病理科提供。

    1.1.3 实验试剂 胎牛血清购自Hyclone公司；RPMI-1640培养基购自Hyclone公司；McCoy 5A培养基购自GIBCO公司；胰蛋白酶(Trypsin)购自吉诺生物医药技术有限公司；琼脂糖 (Agarose)购自Biowest Agarose公司；高效真核转染试剂购自威格拉斯生物技术有限公司；双荧光报告测试系统(Dual-LuciferaseReporter Assay System)购自 Promega公司；DNA Marker DL 2000购自宝生物工程有限公司；限制性内切酶(KpnⅠ、Sal I等)购自Takara公司；焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate，DEPC)购自Duchefa公司；DNA Marker DM8000购自全式金生物公司；dNTPs购自Takara公司；ExTaq DNA聚合酶购自Takara公司；Taq DNA聚合酶购自Fermentas公司；甘氨酸、三羟甲基氨基乙烷(Tris)购自Amresco公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、苯甲基磺酰氟 (PMSF)购自Promega公司；二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇购自武汉天源生物技术有限公司；Revert AidTM First Strand cDNA synthesis kit(#K1622)购自Fermentas公司；PCR产物胶回收试剂盒购自Biospin公司；质粒提取试剂盒购自天根生化科技有限公司；HRP显色试剂盒购自Millipore公司；Moncolonal Anti-STC2 antibody produced inmouse购自Sigma公司；Matrigel胶购自BD公司 ......