陈志航，顾智文，高枫，张森，张小龙

    广西医科大学第一附属医院结直肠肛门外科 广西南宁 530021

    结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，其发病率较高，目前主要以手术治疗为主，对于中晚期患者，除了手术治疗同时也需要化疗来改善疗效。卡培他滨是目前首选的一线化疗药物之一[1]，具有较好的单药治疗效果和联合化疗效果，但是其疗效依然有限，对部分患者效果不佳，会产生耐药性。进一步探究如何提高卡培他滨的化疗效果，探索以卡培他滨为基础的新型化疗方案具有重要的临床价值。细胞自噬是真核生物细胞内物质进行周转的重要过程，通过自噬，一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，进入溶酶体中进行降解并得以循环利用[2]。有研究表明：细胞自噬的激活会对细胞产生保护效果，阻止其发生凋亡，自噬可以帮助肿瘤细胞耐受或阻止化疗药物毒性所引起的细胞破坏，而抑制细胞的自噬将削弱这一保护效应[3]。因此探索细胞自噬与肿瘤之间的关系有助于探索更有效的肿瘤治疗方法。本研究目的是在体外实验中探究在细胞自噬抑制或激活后，卡培他滨对结肠癌细胞HCT-116 增殖与凋亡的影响，从而为寻找更加有效的以卡培他滨为基础的化疗方案提供新的思考方向，现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    DMEM 高糖培养基与澳洲胎牛血清购自美国Gibco 公司；胰酶、二甲基亚砜、双抗-青链霉素混合液均购自北京索莱宝公司；卡培他滨(capecitabine，CAP)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)与雷帕霉素(rapamycin，RAPA)均购自美国MedChemExpress公司；CCK8试剂购自日本同仁化学研究所；MTT试剂盒、Western-bolt 实验相关材料购自中国碧云天公司；AnnexinV-FITC/PI 细胞凋亡双染试剂盒购自美国BD 公司；Beclin-1、LC3 兔抗人单克隆抗体均购自美国CST公司；Bcl2与Bax兔抗人单克隆抗体购自美国Abcam 公司；山羊抗兔IgG(H+L)交叉吸附二抗，Alexa Fluor 680 购自赛默飞世尔科技公司；mCherry-GFP-LC3 双标腺病毒购自上海吉凯基因公司。细胞培养箱购自北京泰泽瑞达科技有限公司；流式细胞仪购自美国BD公司；酶标仪购自美国伯腾公司；双色红外成像系统购自美国LI-COR 公司；激光共聚焦显微镜购自日本Nikon 公司；蛋白电泳及转膜仪购自美国Bio-Rad公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 人结肠癌细胞株HCT-116 购自上海中国科学院细胞库 ......