miR-31-5p通过VPS53介导的自噬对结直肠癌细胞增殖的影响*
荧光素酶,空白对照,阴性,1材料与方法,1实验细胞,2细胞培养,3实时荧光定量PCR(qPCR)实验,4CCK-8法检测细胞活力,5生物信息学分析,6双荧光素酶报告实验,7透射电子显微镜实验
黎爽,彭洪△,龚磊,唐军伟,吴洪,黄梅1 南充市中心医院肛肠外科 四川南充 637000
2 南充市中心医院胃肠外科 四川南充 637000
3 南充市中心医院中西医结合科 四川南充 637000
结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,近年来结直肠癌的发病率呈上升趋势,尤其是在亚洲国家[1]。随着医疗技术的进步,结直肠癌的治疗手段越来越多,但是结直肠癌患者的总体预后依然有待改善,尤其是出现淋巴结转移或远处转移的患者。因此,需要进一步探究结直肠癌发生发展的潜在作用机制,以期为结直肠癌患者治疗方案的制定提供新的思路[2]。
MicroRNA(miRNA)是一类非编码RNA,广泛存在于多细胞生物和真核生物中,参与细胞的多种生理过程,包括基因表达的转录后调控。miRNA可调控肿瘤细胞的多种生物学行为,包括增殖、迁移和凋亡[3]。miRNA的异常表达影响着结直肠癌的发生发展,提示miRNA有可能作为结直肠癌新的治疗靶点[4]。
miR-31-5p由miR-31的5’端臂转录加工而成,在多种细胞和组织中表达,在细胞增殖、分化及维持细胞稳态等方面发挥重要作用[5]。既往研究表明miR-31-5p在多种恶性肿瘤中高表达[6-8],我们前期的研究也发现miR-31-5p在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常结直肠黏膜组织[9],然而miR-31-5p在结直肠癌发生发展中的作用机制尚不明确。通过生物信息学数据库,我们发现miR-31-5p可与VPS53靶向结合,进一步通过GEPIA数据库,我们发现VPS53与自噬相关基因Beclin1的表达呈正相关。自噬是指细胞通过降解自身结构物质使细胞存活的自我保护机制,在肿瘤中自噬可发挥抑癌作用[10]。Beclin1基因(编码Beclin1蛋白)是自噬通路的关键调控基因[11],但miR-31-5p是否通过调控自噬通路及Beclin1的表达参与结直肠癌的发生发展尚不清楚。为此,本研究探讨miR-31-5p通过VPS53介导的自噬对结直肠癌细胞增殖的影响,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验细胞
人正常结直肠黏膜细胞(FHC)与结直肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480、LoVo均购自美国种质保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)。
1.2 细胞培养
HT29、HCT116、SW480、LoVo细胞在含10%胎牛血清、1%青霉素(100 μg/mL)和1%链霉素(100 μg/mL)的DMEM培养基中进行培养 ......
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