黄国付，黄晓琳

    (1.武汉市中西医结合医院针灸科,湖北 武汉 430022；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院康复医学科,湖北 武汉 430030)

    缺血性脑卒中为常见的脑血管疾病，致残率和致死率均较高。对于大多数脑缺血患者而言，神经元死亡不可避免，如何积极有效地促进缺血性脑卒中患者神经功能的恢复仍然是目前脑缺血的研究重点。前期研究表明，电针 (electro-acupuncture，EA)结合经颅磁刺激(repetitive Transcranial Magnetic Stimulation，rTMS)治疗能促进大鼠神经干细胞(neural stem cell，NSC)的增殖，改善大鼠学习记忆能力[1]。本研究采用免疫组化进一步观察电针结合rTMS对局灶性脑缺血大鼠不同时相、不同脑区神经核抗原(neuronal nuclear antigen，NeuN)表达的影响，以探讨其在脑缺血神经修复中的作用机制。现将实验方法及结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 健康雄性清洁级Wistar大鼠120只，体质量为(200±20)g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXR(鄂)2009-0007。

    1.1.2 仪器 石蜡切片机(Leica 2025型，德国)，生物显微镜(Olympus BS-50型，日本)，CCD数码相机(Canon 970型)，图像分析系统(HPIAS21000)，G6805-1型电针治疗仪(青岛华青仪器厂)。

    1.1.3 试剂 5-嗅脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine，BrdU)、小鼠抗大鼠BrdU单克隆抗体，免疫组化染色试剂盒包括生物素化抗小鼠抗体(二抗)、亲和卵白素化过氧化物酶(三抗)均购于Sigma公司；小鼠抗大鼠NeuN单克隆抗体购于Vector公司;大鼠来源BrdU抗体购于Serotec公司；PBS、多聚赖氨酸、异硫氰荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)标记的羊抗小鼠荧光二抗、Cy3标记的羊抗小鼠荧光二抗及SABC免疫组化试剂盒购于北京中山生物技术公司；正常山羊血清，DAB购于武汉BOSTER公司；去离子甲酰胺、TritonX-100、AEC试剂盒购于晶美生物工程有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组及造模 将120只动物随机分为正常组、模型组、电针组、rTMS组和电针结合rTMS组(结合组) ......