陈楚淘，田浩梅，严 洁，张英进，姚 雯，易受乡*

    (湖南中医药大学针灸推拿学院，湖南 长沙 410007；湖南中医药大学针灸推拿学院经穴脏腑相关重点研究室，湖南 长沙 410007)

    本课题组前期研究通过蛋白芯片技术从720种已知蛋白中快速筛选磷酸化水平发生改变的蛋白，综合分析发现以丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路上的蛋白磷酸化的水平改变最为明显，其中以RAF-1蛋白的表达上调量最明显，故进一步选用分子生物方法加以分析，确定与胃黏膜修复有关的信号蛋白种类，阐明电针足阳明胃经促胃黏膜修复的部分作用机制。现将实验方法及结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 选取 SD大鼠，雄性，体质量(200±20)g，共40只，由上海必凯尔实验动物中心提供,许可证号sdxk(沪)2003-0002，饲养于湖南中医药大学实验动物中心，实验前适应环境1周，控制室温20～22℃，相对湿度65%～70%。动物实验于湖南中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局三级实验室、经穴与脏腑相关重点研究室完成。

    1.1.2 仪器 酶标仪 (Thermo)；电泳仪 (北京六一仪器厂)；电泳、转移装置(BIO-RAD)；磁力搅拌器(太仓华美生化仪器厂)；脱色摇床(兴化化仪器厂)；反应容器(上海康成生物有限公司)；G6805-2型电针仪。

    1.1.3 试剂 磷酸化RAF-1抗体(CST公司)；细胞及组织总蛋白抽提试剂盒 (KangChen，KC-415)；BCA蛋白质定量试剂盒(KangChen，KC-430)；丙烯酰胺、双丙烯酰胺、20%SDS(w/v)、Tris-Cl 1.0 M pH 8.8、Tris-Cl 1.0 M pH 6.8、10%APS、TEMED、生物素的标记的蛋白分子量标准(KangChen，KC-410)、 甘氨酸、β 巯基乙醇溴酚蓝、10×电泳缓冲液(Tris碱 30.3 g，甘油 144 g，SDS 10 g，双蒸水调至体积为1 L)。

    1.2 方法

    1.2.1 动物分组 动物编号并随机分为4组，每组10只。A组：空白组；B组：模型组；C组：针刺治疗组；D组：针刺对照组。

    1.2.2 动物造模 参照无水乙醇灌胃法[1]制作大鼠胃黏膜损伤模型，除空白组外，其余造模大鼠均禁食不禁水24 h，24 h后行无水乙醇灌胃，先用普通注射针头 ......