冷 旺

    (湖南中医药大学附属常德市第一中医院，湖南 常德 415000)

    六味地黄丸含有丹皮酚、熊果酸、马钱苷等化学成分,但目前使用血清药理学来研究六味地黄丸的报道仅有几例，张宁等[1]进行了六味地黄丸血中入血成分的含量测定，确定了其含药血清中用高效液相色普仪可检测的马钱苷、丹皮酚等10种入血成分；提示这些有效成分可能为该方作用的物质基础,为进一步研究该方的作用及机理奠定了基础。在前期实验中，我们以血药浓度法作为手段，采用高效液相色谱技术对六味地黄丸含药血清进行了测定，发现马钱苷、丹皮酚、芍药苷等均为其主要入血成分，因此，在本研究中我们选用马钱苷、丹皮酚和芍药苷三个主要入血成分来研究其对大鼠前脂肪细胞内cAMP的影响。现将实验方法及结果报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 健康SD大鼠，清洁级，雌雄各半，体质量(200±20)g，由河南省实验动物中心提供。许可证号：SCXK(豫)2005-0001。

    1.1.2 仪器 3K30型高速冷冻离心机(sigma公司产品)；UV-1600紫外分光光度计 (北京瑞利分析仪器公司产品)；佳能照相系统；XDS-1B体式倒置相差显微镜(日本Olympus)；Heracell型细胞培养箱 (德国贺利氏产品)；超净工作台(北京半导体设备一厂)；台式离心机(北京医用离心机厂)；恒温水浴箱(北京半导体设备一厂)。

    1.1.3 药物与试剂 六味地黄丸(浓缩丸)，由湖南省长沙市九芝堂制药有限公司生产，批号060361；马钱苷标准品购自河北医科大学药学院天然植物教研室；芍药苷、丹皮酚标准品购自中国药品生物制品研究所；肾上腺素，pH 7.2缓冲生理盐水(自制)；细胞培养液(DMEM/低糖)购自美国Hyclone公司,胎牛血清购自兰州民海生物有限公司，胰酶购自sigma公司，cAMP试剂盒购自上海中医药大学同位素室，其余试剂均为分析纯。

    1.2 方法

    1.2.1 大鼠前脂肪细胞的培养 取雄性大鼠腹股沟部纯净脂肪颗粒，pH 7.2缓冲生理盐水(PBs)洗涤后剪成0.5～1 mm3大小均匀的小颗粒，以1 000 r/min离心10 min取上层的纯脂肪颗粒，轻轻地铺于经培养液润湿的培养瓶壁上。3～5 min后徐徐加入含20%胎牛血清的DMEM/低糖培养液5～10 mL ......