谢秋群，唐雄志，王世宣

    (1.华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科，湖北 武汉 430030；2.桂林市人民医院妇产科，广西 桂林 541002)

    ephrinB2真核表达载体的构建及其在Hela细胞的表达

    谢秋群1,2，唐雄志1，王世宣2*

    (1.华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科，湖北 武汉 430030；2.桂林市人民医院妇产科，广西 桂林 541002)

    目的 构建ephrinB2重组真核表达载体，研究该质粒在细胞中的表达，为研究ephrinB2对肿瘤生长及血管生成的影响奠定基础。方法 逆转录获得人ephrinB2全长cDNA序列，连接到pEGFPN1上，转化大肠杆菌，脂质体转染Hela细胞。RT-PCR检测转录情况，WB鉴定目的蛋白表达。结果 酶切和测序证实正确构建重组质粒，并在Hela细胞中表达。结论 成功构建了pEGFPN1-ephrinB2真核表达载体，并在Hela细胞中有效表达，为进一步研究ephrinB2的功能奠定基础。

    ephrinB2；载体构建；蛋白表达

    ephrinB2及其受体EphB4是目前已知的酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的一个亚家族Eph/ephrin家族成员之一，是血管形成过程中动静脉分化的标志，在很多肿瘤组织中都显示高表达，与肿瘤的发展及其血管生长的关系非常密切。其对肿瘤的影响具有双重性，既有肿瘤抑制作用，又有肿瘤促进作用。EphB4磷酸化激活后的正向信号可抑制肿瘤的发生、发展，促进肿瘤细胞凋亡，抑制其迁移、侵袭；反向信号则经ephrinB2+细胞向胞内传递，促进肿瘤细胞生长、增殖、迁移和侵袭[1]。近来的研究显示EphB4和ephrinB2与妇科肿瘤有着密切的联系，深入研究其作用机制将有利于进一步了解妇科肿瘤的发病机制、发现全新有效的靶向治疗和干预途径，有望成为肿瘤早期诊断及判断预后的指标之一，亦可作为肿瘤治疗新的靶点，有助于完善现有的肿瘤治疗措施[2，3]。本研究通过构建ephrinB2基因重组真核表达质粒，并研究该质粒在真核细胞中的有效表达，为研究ephrinB2对肿瘤生长及血管生成的影响奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株、质粒和细胞株：真核表达质粒pEGFPN1，宿主大肠杆菌DH5α由本实验室保存，细胞株Hela购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。

    1.1.2 主要试剂：RNA提取试剂TRIzol购自Gibco 公司，逆转录酶M-MLV 购自Promega 公司 ......