陈伶利 ，李 杰 ，贺气志 ，陈 辉 ，毛平道 ，邓 乐 *

    (1.湖南师范大学生命科学学院，湖南 长沙 410081；2.湖南中医药大学基础医学院，湖南 长沙 410208)

    基于核酸适配体-荧光染料EvaGreenTM快速检测ATP的研究

    陈伶利1,2，李 杰2，贺气志1，陈 辉1，毛平道1，邓 乐1*

    (1.湖南师范大学生命科学学院，湖南 长沙 410081；2.湖南中医药大学基础医学院，湖南 长沙 410208)

    目的 利用荧光嵌入染料EvaGreenTM在单双链DNA溶液中不同的荧光性质构建基于核酸适配体的ATP检测体系，建立一种简单、高效的检测ATP的新方法。方法 利用ATP核酸适配体双链DNA(dsDNA)和核酸绿色荧光染料Eva GreenTM嵌合作用，实现了对ATP的检测。考察了ATP的孵育温度、pH、浓度等因素对荧光强度的影响,并对该方法的特异性进行了验证。结果 反应体系在12℃，pH 7.5条件下具有最佳实验效果，在最优条件下，最低能检测10-6mol/L的ATP，并具有较高的特异性。结论 本研究为ATP的快速检测提供了一种易于操作、低成本的新方法。

    核酸适配体；EvaGreenTM；ATP；检测

    腺嘌呤核苷三磷酸 (adenosine-triphosphate,ATP)在生物体与外界进行物质和能量交换的过程中，起着重要的桥梁、纽带作用，它是生物体各种生命活动能量的直接来源，因此在很多的生物反应检测中ATP是一项重要的检测内容[1-2]。目前，检测ATP的方法主要有电泳法、光学分析法、层析法、生物发光法(荧光素酶法)等，但是以上方法操作复杂、费时，且灵敏度不高；2009年 Li W等人提出用金纳米粒子来检测ATP，可以检测到1～10mmol/L的ATP，大大提高了检测灵敏度，但此方法需要制备特异的核酸修饰的金纳米探针，检测成本较高[3]。Huizenga和 Szostak于1995年通过SELEX技术筛选出ATP/Adenosine适配体[4]，基于适配体技术的检测研究受到了极大的关注[5-7]。2008年Zhang Chen等将量子点标记的适配体生物传感器用于ATP检测[8]，2009年孙波等用高灵敏适配体电化学发光生物传感器来检测血样中的ATP[9]，但是这些方法需要使用特殊试剂，分析成本较高。染料Eva GreenTM是一种绿色荧光核酸染料，它有良好的热稳定性和水解稳定性，为常规操作提供了便利，而Eva GreenTM本身没有荧光，与dsDNA嵌合后能发出高亮度的荧光 ......