林 洁 ，贾春燕 ，王若光 ，王 璇 ，肖艳娟 ，叶 赞

    (1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学2007级研究生班，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；4.湖南中医药大学2006级研究生班，湖南 长沙 410208)

    蒲黄黄酮对缺氧损伤血管内皮细胞的保护作用

    林 洁1，贾春燕2，王若光3，王 璇4，肖艳娟4，叶 赞4

    (1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学2007级研究生班，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；4.湖南中医药大学2006级研究生班，湖南 长沙 410208)

    目的 研究蒲黄黄酮对缺氧损伤血管内皮细胞人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)活性、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)含量的影响。方法 缺氧诱导血管内皮细胞损伤，MTT比色法观察蒲黄黄酮对血管内皮细胞的影响，酶联免疫法测定细胞培养液中内皮素-1(ET-1)、NO的含量。结果 蒲黄黄酮可提高缺氧时HUVE-12细胞活性，减少NO降低程度(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 药物 蒲黄黄酮乙醇提取浸膏，生药含量为1.6%，由湖南中医药大学药学院制备提供。阳性对照药17-β雌二醇，由美国Sigma公司提供。

    1.1.2 细胞 人脐静脉内皮细胞株HUVE-12，引自湘雅细胞中心。

    1.1.3 仪器 全自动酶标仪(MK3)购自芬兰LABSYSTEMS集团，紫外分光光度仪(UU-754)上海第三分析仪器厂，倒置显微镜(XDS-1B)购自重庆光学仪器厂。

    1.1.4 试剂 DMEM培养基、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)，购于美国Sigma公司。小牛血清，购自湘雅细胞中心。二甲基亚砜(DMS0)，购于索莱宝科技有限公司。NO检测试剂盒(南京建成科技有限公司)，人内皮素1(ET-1)ELISA检测试剂盒(RD)。

    1.2 方法

    1.2.1 HUVE-12细胞的培养及分组 将人脐静脉内皮细胞HUVE-12培养于DMEM培养液中，其中含 10%小牛血清，青霉素 100 U/mL，链霉素100/mL，37 ℃，5%CO2培养箱中培养，按 2.5×104个细胞/孔的细胞密度接种于96孔板，继续培养24 h，待HUVEC-12细胞生长呈亚融合状态时分成6组，分别在不同条件下培养(n=5)即：蒲黄黄酮150μg/mL细胞组(简称高剂量组)、蒲黄黄酮100μg/mL细胞组(简称中剂量组)、蒲黄黄酮50μg/mL细胞组(简称低剂量组)、17-β雌二醇10-8mol/L细胞组(简称阳性对照组)、正常培养细胞组(简称正常组)、缺氧组(单纯缺氧培养细胞 ......