刘文龙 ，张喜利 ，贺福元 ，王海琴 ，江星明 ，石继连 ，杨岩涛 ，包小燕 ，陈作红 *

    (1.湖南师范大学生科院，湖南 长沙 410081；2.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)

    中药植物体为了维持有机体正常生存条件和抵御外界不利环境因素而进行着一系列的代谢活动，其代谢活动分为初生代谢和次生代谢。初生代谢生成了叶绿素、糖类、蛋白质等维持其生存所必需的初生代谢产物；次生代谢是为了应激某种反应或者适应生存环境的某种变化而代谢生成了许多中间体或最终产物，即中药(有效)成分。自然界的生物都是在“遗传”的基础上不断的“变异”以适应周围生存环境。中药的种植生长过程亦是一个遗传变异过程，遗传使得中药的品种不变，变异使得中药成分变化，这是一个自然规律，是任何改变外部因素所不能改变或者是控制的。因此，在传统的质控模式的基础上，应进一步揭示并利用此规律来控制中药材的质量。

    鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuyniae cordata Thunb.的新鲜全草或干燥地上部分。其性辛、微寒,具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋等功能。主要应用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢、热淋、痈疮肿毒等症[1]。目前,市场上已有以鱼腥草为原料的诸多现代制剂广泛应用于临床，然而因原料的质量差异导致成药质量不稳定，其中鱼腥草注射液因出现免疫毒性而停止生产使用。

    近年来，有关利用RAPD或ISSR标记对不同产地鱼腥草种质资源遗传多样性方面的研究已见报道[2-5]，阐明了不同产地鱼腥草存在明显的基因多态性现象，合理解释了道地药材与GAP质控的科学性。而本文以单株鱼腥草为模型中药，联合应用ISSR和RAPD标记对同一GAP产地鱼腥草株间基因多态性展开研究，旨在进一步揭示在完全相同的外部因素(环境因素)下遗传基因多态性规律，为中药的质量稳定性控制提供一种新的思路与方法。

    1 实验材料

    1.1 材料

    鱼腥草采自湖南怀化同一GAP产地，经湖南中医药大学鉴定教研室老师鉴定，采取新鲜完整植株，于-70℃冰箱保存。

    1.2 试剂

    ISSR引物和RAPD引物由北京擎科新业生物科技有限公司合成，植物DNA快速提取试剂盒和PCR扩增所需试剂均购自北京康为世纪生物科技有限公司。

    1.3 仪器

    DK-8D电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)；TGL-16G型低温高速离心机(上海安亭科学仪器制造)；LDZX-30KBS立式压力蒸气灭菌器(上海申安医疗器械厂)；CM-230超纯水系统(北京帕思特科技有限公司)；Biophotometer核酸蛋白分析仪 (德国 Eppendorf公司)；5332型 Eppendorf PCR仪 (香港艾本德中国有限公司)；DYY-8C型电泳仪(北京市六一仪器厂)；GZS-1000B型凝胶图像处理系统(上海天能科技有限公司) ......