蛋白印迹法检测寿胎丸对反复自然流产模型小鼠子宫蜕膜的蛋白表达
低剂量,1材料,1实验动物,2实验药物,3主要仪器,4主要试剂,2方法,1动物造模方法4,2动物分组及给药方法,3标本制备方法,4westernblot分析方法,5统计学分析,3结果,1小鼠蜕膜组织
雷 磊,李慧芳,谭展望,罗 蕾,卢丽丽(1.湖南中医药大学分子病理实验室,湖南 长沙410208;2.河北省妇幼保健中心妇女保健科,河北 石家庄050031)
前期通过双相电泳及质谱技术发现并鉴定了30 个可能与复发性流产及寿胎丸干预相关的蛋白质,提示寿胎丸可调节复发性流产小鼠蜕膜组织多种蛋白质的表达[1]。课题组曾探讨寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面SOCS1 和SOCS3 蛋白表达的影响,结果表明寿胎丸可能通过降低小鼠母胎界面SOCS1 蛋白表达及提高SOCS3 蛋白表达,进而调控Th 细胞向Th2 方向分化,故对反复自然流产有治疗作用[2-3]。本文应用蛋白印迹(western blot)技术对部分差异表达蛋白质的表达水平进行验证。希望通过上述研究,对母胎界面的病理生理提供更为全面和有价值的信息,进而从分子水平探讨寿胎丸安胎的作用机制,为中医药防治复发性流产提供实验依据。
1 材料
1.1 实验动物
健康雌性CBA/J 小鼠50 只,SPF 级,8 周龄,体质量(19.7±2.3)g,由中国医学科学院实验动物研究所提供,许可证号:SCXK(京)2009-0004;健康雄性DBA/2 小鼠20 只,SPF 级,8 周龄,体质量 (24.7±2.5)g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,许可证号:SCXK(沪)2007-0005;健康雄性BALB/C小鼠5 只,SPF 级,8 周龄,体质量(23.2±1.8)g,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,许可证号:SCXK(湘)2009-0004。
1.2 实验药物
寿胎丸由菟丝子、续断、桑寄生和阿胶4 味中药饮片按2∶1∶1∶1 比例组成,将前3 味药混和,置圆底烧瓶中,加10 倍量水,加热回流提取2 h,提取液滤过,残渣加10 倍量水继续加热回流提取2 h,提取液滤过,合并2 次滤液,阿胶烊化于滤液中,浓缩至含生药量1 g/mL,4 ℃保存备用。
1.3 主要仪器
BMJ-1 生物组织包埋机(天津航空机电公司);Shandon325 石蜡切片机 (英国Shandon 公司);LEICA DM LB2 双目显微镜(德国LEICA 公司);Motic B5 显微摄像系统 (麦克奥迪实业集团公司);MIAS医学图像分析系统(北航公司);低温高速离心机(德国Eppendorf 公司);紫外分光光度计 (美国Beckmen 公司);垂直电泳槽、转移电泳槽及电泳仪(美国Bio-Rad 公司);图像扫描仪(美国Bio-Rad 公司);Kodak Digital Science ID 图像分析系统 (美国Kodak 公司) ......
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