钟 飞，周卫华，张 洁，杨梅松竹，石慧娟，彭英福，李双杰

    (1.吉首大学医学院，湖南 吉首416000；2.湖南省儿童医院肝病中心，湖南 长沙410007)

    心肌细胞凋亡是在一定生理和病理条件下，通过特殊信号转导途径，激活细胞“自杀”程序，在基因调控下进行的程序化死亡。目前认为心肌细胞凋亡是心血管疾病发生发展的细胞学基础，在心肌病的发生发展过程中起重要作用[1]。心肌组织死亡结构域相关蛋白(Daxx)是(death domain-associated protein，Daxx)是Yang[2]等在1997年发现的一种Fas 死亡结构域结合蛋白，可激活c-Jun 氨基末端激酶 (c-Jun Nterminal kinase，JNK) 通路诱导细胞凋亡；研究显示，干预Daxx 在心肌中的表达，可减少大鼠心肌梗死的面积与心肌细胞的凋亡[3]，我们推测Daxx 可能成为调节细胞凋亡新的重要药理作用靶点，我们以前的研究表明黄芪甲苷具有减少阿霉素性致心肌细胞凋亡作用，本研究在前期工作的基础上，进一步探讨黄芪甲苷调控心肌细胞凋亡的作用机制，为开发研究提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 雄性SD 大鼠30 只，SPF 级，体质量200～250 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2009-0012。

    1.1.2 药物 黄芪甲苷(成都锦泰和医药化学技术有限公司)，保存于4 ℃冰箱，用甲基纤维素钠配成5 mg/mL；阿霉素(购自湘西自治州肿瘤医院)。

    1.1.3 试剂 山羊抗Daxx 抗体、辣根过氧化物酶标记驴抗山羊IG、β-actin 小鼠多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记兔抗小鼠IG、complete TM pretease inhibitor cocktail tablet，均由Santa 公司公司提供。PageRulerTM Puls pertained protein ladder(fermentas 公司)；硝酸纤维膜、BCA 蛋白浓度测定试剂盒，ECL 超敏化学发光试剂，均由江苏南通碧云天生物技术研究所提供；RIPA Lysis buffer(Millipore 公司)；PE 导管(内径0.58 mm，外径0.99 mm，美国健康医疗仪器国际公司)。

    1.1.4 仪器 TGL-16G 冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂生产)；723 可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；莱卡切片机(RM2126 上海)；全自动生物组织脱水机(YD-12G 金华益迪医疗设备有限公司)；生物组织包埋机(YD-6L 产地金华益迪医疗设备有限公司)；紫外分光光度计(UV-3100 产地上海美普达仪器有限公司) ......