谭 雄，张 辉，聂孝平，王建国，毛湘屏，陈朝晖，毛以林*

    (1.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙410007；2.湖南中医药大学，湖南 长沙410208)

    慢性心力衰竭 (Chronic heart failure，CHF)是各种心血管疾病的终末阶段，病死率高，水潴留是其最重要的病理生理变化之一[1]。 研究表明CHF 时水潴留机制的主要途径：心输出量下降，由下丘脑产生的血管加压素(arginine vasopressin，AVP)水平升高，作用于肾脏集合管主细胞AVPV2 受体，通过异三聚体G 蛋白(Gs 蛋白)激活膜内腺苷酸环化酶，使主细胞内cAMP 升高， 继而激活胞质内蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)，使AQP2 发生磷酸化并由胞浆囊泡向管腔膜转移，通过胞吐作用融合并嵌入管腔膜，水通道开放，形成水潴留[2]。 前期临床研究表明，临床效方心康饮对慢性心衰合并利尿剂抵抗的患者具有良好效果[3]，现将该方制作成颗粒冲剂，观察其对慢性心衰大鼠AQP2mRNA、AVPV2mRNA的影响，进一步探讨其抗心衰作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 SPF 级雄性SD 大鼠70 只， 体质量180～220 g， 由湖南斯莱克景达实验有限公司提供动物许可证号：SCXK(湘)2011-0003。

    1.1.2 药物 盐酸多柔比星，深圳万乐药业(批号：1206E5)； 芪苈强心胶囊， 石家庄以岭药业 (批号：123901)； 心康冲剂(黄芪30 g， 白参10 g， 陈皮10 g，茯苓15 g，桂枝6 g，制附片10 g，薏苡仁30 g，生姜皮10 g，大腹皮10 g，柴胡5 g，升麻5 g，桔梗5 g，砂仁6 g)，经湖南省中医院药剂科制成颗粒剂(15 g/包)，每克相当于生药3.38 g。

    1.1.3 试剂 常规化学试剂由北京化学试剂公司提 供；Tris、Trizol、DEPC 均 由Sigma 提 供；SYBGREEN PCR Mix Mix、Taq 酶、 逆 转 录 试 剂 盒、DL1000 DNA Marker、dNTP 均 购 于Genstar；EDTA由Fermentas 提供；E.B.购买于ABI；水合氯醛由天津科密欧化学试剂公司提供。

    1.1.4 仪器 旋涡混合器VORTEX-5、 摇床ZD-2008(江苏海门其林贝尔仪器公司)；台式冷冻离心机5417R (德国eppendorf 公司)； 荧光定量RCP 仪Thermo Scientific/ARL(美国Thermo 公司)；水平琼脂糖电泳仪DYCP-34A(北京六一仪器厂)；电动玻璃匀浆器DY89-Ⅱ (宁波新芝科技股份有限公司) ......