陈 聪，吴勇军，喻 嵘*，唐 元，罗文娟，曾 婧，张 翔

    (湖南中医药大学，湖南 长沙410208)

    足细胞是糖尿病肾病 (Diabetic nephropathy，DN)发生发展的关键靶细胞之一，足细胞的损伤和剥脱，与DN 早期发病相关，明显早于肾小球硬化和肾间质病变[1-2]。 细胞凋亡是足细胞丢失的重要原因之一。内质网应激凋亡信号分子Caspase-12 的活化与细胞凋亡密切相关[3-4]。 高糖环境是引起足细胞凋亡及(或)死亡的原因之一，其具体分子机制尚不清楚[4-5]。 课题组前期研究发现中药复方左归降糖益肾方可以改善糖尿病肾病MKR 鼠肾功能， 保护足细胞结构[6]。 本研究在前期研究基础上，进一步探讨经高糖处理体外足细胞后，足细胞损伤的可能分子机制，并为糖尿病肾病的靶向治疗提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞培养 小鼠足细胞购自北京协和细胞中心(Mouse podocyte；3111C0001CCC000230)。 以含10%胎牛血清，90%的DMEM 完全培养基 (含100 U/mL 青 霉 素、100 μg/mL 链 霉 素、25 mmol/L葡萄糖)在5%CO2，37 ℃培养箱中培养。期间2～3 d更换培养液1 次，相差显微镜观察细胞形态，待细胞体积明显增大，向四周伸出足突分化成熟后用于实验。

    1.1.2 动物 Wistar 大鼠40 只，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司， 饲养于湖南中医药大学SPF级实验动物中心，许可证号：SYXK(湘)2013-0005)。

    1.1.3 主要试剂 总RNA 提取试剂盒， 购自天根生化科技有限公司；逆转录试剂盒，购自Fermentas公司；PCR 引物，由上海生工公司合成；葡萄糖(分析纯)，购自上海国药集团化学试剂有限公司；兔抗小鼠Caspase-12 多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司；Hoechst 33258 荧光染料， 购自合肥博美生物科技有限责任公司；AnnexinV-FITC 细胞凋亡检测试剂盒，购自深圳欣博盛生物技术有限公司。

    1.1.4 仪器 WD-9402 A 型PCR 扩增仪， 购自北京六一仪器厂；F1-F2 Fuses Type T2A 型化学发光凝胶成像分析系统， 购自Bio-Rad 公司；BioPhotometer plus 型核酸蛋白分析仪， 购自Eppendorf 公司；Aria2 型流式细胞检测仪， 购自BD 公司；A1 型激光共聚焦显微镜 ......