付小金，刘旺华*，李 花，金朝晖，周小青

    (1.湖南中医药大学中医诊断学研究所，湖南 长沙410208；2.湖南中医药大学中医学院，湖南 长沙410208；3.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙410007)

    脑缺血/再灌注损伤是一个快速级联反应过程，是由能量代谢障碍、兴奋性氨基酸中毒、氧自由基生成增多、细胞内钙超载、炎症反应和细胞凋亡等多种因素参与的病理过程[1]，而影响它的主要病理机制是炎症反应和细胞凋亡。 核因子-κB(nuclear factor-κappa B，NF-κB) 信号通路可调控多种炎症因子及凋亡基因的转录，参与炎症级联反应及细胞凋亡等病理过程[2]。 目前，已有大量实验研究表明，通过抑制NF-κB 信号通路， 下调相关因子表达，可减轻脑缺血/再灌注损伤。实验前期研究表明健脾补土方对脑缺血/再灌注损伤神经功能具有保护作用，其机制可能与抑制MMP-2[3]和MMP-9 表达，减少层黏连蛋白降解[4]，抑制无菌性炎症的产生，从而维护基底膜的完整性保护血脑屏障有关，但其具体机制还不清楚。 本实验通过研究健脾补土方对大鼠脑缺血后炎症因子的上游因素NF-κB、NF-κB 抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB α，IκBα)表达的影响，探讨健脾补土法对脑缺血/再灌注损伤大鼠神经保护作用的机制。

    1 材料和方法

    1.1 动物

    健康清洁级SD 雄性大鼠120 只， 体质量(240±20)g， 由湖南斯莱克景达实验动物有限司提供，动物许可证号：SCXK(湘)2013-0004，动物合格证号：NO43004700006140。

    1.2 药物与试剂

    健脾补土方以经典四君子汤为基础配伍，组方：人参15 g，白术12 g，茯苓10 g，黄芪15 g，山药12 g，薏苡仁12 g，炙甘草6 g。 药物购自湖南中医药大学第一附属医院。 药液制备： 清水浸泡30 min 后，第1 次加6 倍水煎煮40～60 min，第2次加4 倍水煎煮30 min， 将2 次滤药液混合并水浴浓缩至生药浓度为1 g/mL，灭菌分装，4 ℃冷藏备用。依达拉奉注射液(吉林省博大制药有限公司，规格：10 mL/15 mg)。 10%水合氯醛、 多聚甲醛系天津市科密欧化学试剂有限公司产品，一抗兔抗大鼠NF-κB/p65(10745-1-AP)、兔抗大鼠IκBα(SC-324882)、兔抗大鼠β-actin (600008-1)系Proteintech 公司产品， 其他试剂由上海国药生物公司生产 ......