电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞Wnt1、GSK-3β蛋白的影响
大椎穴,1材料与方法,1动物来源及分组,2主要药物,试剂及仪器,3方法,4标本采集,5指标检测,6统计学分析,2结果,3讨论
黄萍萍,廖 军*,郑春水,郑佳璇,张 乐,谢巧瑜(福建中医药大学针灸学院,福建 福州350122)
颈椎病是临床常见多发病,属中医学“痹症”、“项强”、“颈间痛”、“眩晕”等范畴[1-2]。 近年来,大量的研究显示了椎间盘细胞的衰老和凋亡是其组织退变过程中的一个非常重要的因素, 然而退变的椎间盘组织中细胞凋亡的确切病因及病理生理机制目前仍不十分清楚[3]。 最近的研究揭示,Wnt/β-catenin 信号转导通路在椎间盘退变以及维持椎间盘细胞外基质内稳定中起着重要的作用,参与着细胞生长、增殖、分化、凋亡等广泛的生物学过程[4],成为颈椎间盘退化治疗的靶点之一。 Wnt1 是Wnt信号通路中关键的成员之一,作为Wnt 信号通路的始动因子而发挥作用;糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)则作为Wnt 信号通路的抑制因子发挥作用。 本文通过观察电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞经典的Wnt 信号转导通路中关键调节因子Wnt1、GSK-3β 表达的影响,探讨电针“大椎穴”对颈椎间盘退变调控的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物来源及分组
SPF 级SD 大鼠40 只,体质量(180±20)g,雌雄各半, 由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供,清洁级, 合格证编号:2007000507918, 许可证号:SCXK(沪)2007-0005。 通过随机分为空白组10 只,造模组30 只, 造模成功后随机分为模型组、 电针组、美洛昔康组,每组各10 只。 由我校实验动物中心饲养,许可证号:SYXK(闽)2005-0004。
1.2 主要药物、试剂及仪器
美洛昔康片 (上海勃林格殷格翰药业有限公司, 批号:H20020217);HANS-100 型韩氏电针仪(石家庄福赛医疗器械有限公司); 超低温冰箱(SANYO 公司);水平摇床(上海琪特公司);Trans-Blot 转印槽(Bio-Rad 公司); 电泳仪(Bio-Rad 公司); 垂直电泳槽 (Bio-Rad 公司); 凝胶成像系统(Bio-Rad 公司);DYY-6B 型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂); 一抗 (Wnt1,Gsk-3β, 美国CST 公司);二抗(山羊抗兔IgG,Beyotim TECHCO,Ltd)。
1.3 方法
1.3.1 动物造模 参考王拥军等[5]的方法建立动静力失衡性颈椎间盘退变大鼠模型,将大鼠仰卧固定手术台上,2%戊巴比妥钠 (40 mg/kg) 腹腔注射麻醉 ......
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