姚 曼，梁淑芳，程彬彬，凌昌全*

    (第二军医大学长海医院中医肿瘤科，上海200433)

    糖皮质激素(Glucocorticoid, GC)广泛应用于临床， 用于治疗多种慢性炎性及自身免疫性疾病。 然而长期应用糖皮质激素，常常会引起很多副作用，其中，糖皮质激素性骨质疏松症(Glucocorticoid-induced osteoporosis, GIOP)就是其最严重的副作用之一。 有研究表明，在接受GC 治疗超过6个月的患者中， 约有30%会发生骨质疏松症[1]；而长期接受GC 治疗的成年患者中约有30%～50%发生骨质疏松性骨折[2]，因此，积极防治GIOP 对临床长期接受GC 治疗的患者具有重要意义。

    我们前期研究发现， 人参皂苷(Ginsenoside，GSS)能够拮抗糖皮质激素诱发的大鼠骨质疏松症[3]。鉴于对骨形成的抑制是GIOP 发生的关键作用机制，因此，我们在体外初步观察了对成骨细胞增殖的影响，并探讨了其作用机制。

    1 实验材料

    1.1 试验药物

    人参总皂苷按报道的方法由第二军医大学药学院采用乙醇回流法提取[4]，纯度>95%。 用DMSO 溶解后储存于-20 ℃。

    1.2 细胞株

    MC3T3-E1 小鼠成骨细胞系购自中科院上海细胞所。

    1.3 试剂

    αMEM 培养基购自Thermo Scientific 公司，二甲基亚砜购自美国AMRESCO 公司，胎牛血清购自法国Biowest 公司，MTT、 台盼蓝购自Sigma-Aldrich，蛋白凝胶试剂盒、Western 及IP 细胞裂解液(碧云天生物技术研究所， 货号：P0013B)、SYBR GREEN Realtime PCR Master Mix (TOYOBO、Code：QPK-201)、p21 抗体(No.#2947S)、p27 抗体(No.#3686S)、Cyclin D1 抗体 (No.#2978S) 均购自美国Cell Signaling Technology 公司。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    小 鼠MC3T3-E1 细 胞： 用 含 有10%FBS 的αMEM 完全培养基在37 ℃、 体积分数为5%的CO2、完全饱和湿度条件下常规培养，每48 h 更换培养基，细胞生长铺满培养瓶底80%后，用0.25%胰蛋白酶联合0.02%EDTA 消化传代，实验选用第3～5代对数生长期细胞 ......