养阴润目丸对干眼模型大鼠结膜上皮细胞中ICAM-1、p38MAPK、p-p38MAPK表达的影响

    李点1，王超群2，廖亮英1，胡平2，彭银艳2

    (1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙410007；2.湖南中医药大学，湖南长沙410208)

    〔摘要〕目的研究养阴润目丸对干眼模型大鼠结膜上皮细胞中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38(p-p38MAPK)表达的影响。方法将60只SD雄性大鼠随机分为5组(正常组、假手术组、养阴润目丸组、新泪然组、模型组)，每组12只。除正常组与假手术组外均采用去势法制造干眼模型。造模成功后一周开始分别给药治疗。用药3个月后，分别进行泪液分泌试验(SIT)及泪膜破裂时间(BUT)的检测，取大鼠结膜上皮细胞，采用免疫组化法检测p38MAPK的表达，采用Western blot法检测ICAM-1、p-p38MAPK的表达。结果与模型组比较，养阴润目丸组SIT明显增多，BUT明显延长；养阴润目丸可显著减少结膜上皮细胞中ICAM-1、p38MAPK、p-p38MAPK的表达，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1实验动物健康，无眼部疾患，1月龄SD雄性大鼠60只，体质量120～150g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK(湘)2011-0003。泪液分泌试验(schirmer I test,SIT) ≥10mm/5min和泪膜破裂时间(break-up time, BUT)≥10s的动物方可使用。每4只1笼，常规饲料喂养，控制室温25℃左右，湿度55%左右。

    1.1.2主要药物养阴润目丸(湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供)方药组成：生地黄，当归，枸杞子，沙参，白芍等。新泪然滴眼液(Alcon Laboratories，Inc；批号:219429F)主要含右旋糖酐、羟丙甲纤维素，甘油等。

    1.1.3主要试剂p38(武汉博士德，BA1325-2)；ICAM(武汉博士德，A2189)；β-actin(Epitmics，1854-1)；羊抗鼠HRP标记二抗(碧云天，A0216)；RIPA组织细胞快速裂解液(上海基尔顿生物，BYL40825)；BCA蛋白定量试剂盒(thermo，PICPI23223)；蛋白预染Marker(Fermentas，SM1811)；NC膜(Millipore，HATF00010)；即用型SABC免疫组化染色试剂盒(北京中杉金桥 ......