邓奕辉，成绍武，易亚乔，覃弘宇，李银，李定祥*

    (湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室，湖南长沙410208)

    解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤ERK1/2信号通路表达的影响

    邓奕辉，成绍武，易亚乔，覃弘宇，李银，李定祥*

    (湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室，湖南长沙410208)

    目的探讨急性缺血性中风(AIS)瘀毒病机的分子机制及解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧损伤的保护作用。方法(1)用凝血酶合并缺氧损伤PC12细胞，模拟急性缺血性中风的体外细胞模型。(2)将细胞分为空白组，模型组，解毒化瘀方含药血浆组和PD98059组(MEK抑制剂组)，应用荧光定量实时RT-PCR方法检测MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达，应用免疫荧光法检测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达。结果PCR结果提示：模型组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达与空白对照组相比显著升高(P<0.01)，解毒化瘀方组和PD98059组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达较模型组显著降低(P<0.01)，免疫荧光结果提示：解毒化瘀方组和PD98059组ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论解毒化瘀方以凝血酶为作用的分子靶点，能够显著降低ERK1/2信号通路在缺血性中风体外细胞模型中的表达。

    解毒化瘀方；急性缺血性中风；凝血酶；ERK1/2信号通路；黄连解毒汤

    急性缺血性中风(acute ischemic stroke，AIS)是最常见脑血管疾病之一，占各类脑中风(stroke)的60%～80%[1]，已经成为严重影响人类健康和社会经济的重大医学问题。近年来，有关急性缺血性中风的机制的主要学说有能量耗竭、兴奋性氨基酸毒性、梗死灶周边半暗带去极化、炎性细胞因子、钙离子超载、一氧化氮(NO)和自由基损伤、细胞凋亡等[2-3]。本研究在总结前期研究成果和继承传统中医理论的基础上，提出了AIS的主要病机为与凝血酶毒性相关的瘀血阻滞、毒损脑络，解毒化瘀法是该病有效治法的假说，并从ERK1/2信号转导通路来探讨解毒化瘀方神经保护作用的分子机制。

    1 材料

    1.1实验药物与试剂

    解毒化瘀方(药物组成有黄连、黄芩、黄柏、栀子、红花、川芎、赤芍和地龙，由黄连解毒汤加味而成)饮片(购于湖南省中医药研究院附属医院)；胰蛋白酶(Sango公司)、DMEM HIGH GLUCOSE(1X)培养基(美国HyClone试剂公司 ......