施利，毛丹，张绍钒，黄建华，刘新义，张英进，雷三林，马进安，向大雄，胡春宏，张四方*

    (1.中南大学湘雅二医院，湖南长沙410008，2.湖南中医药大学药学院,湖南长沙410028)

    健脾解毒方对大肠癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的影响

    施利1，毛丹1，张绍钒1，黄建华2，刘新义1，张英进1，雷三林1，马进安1，向大雄1，胡春宏1，张四方1*

    (1.中南大学湘雅二医院，湖南长沙410008，2.湖南中医药大学药学院,湖南长沙410028)

    目的探讨健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响及可能作用机制。方法采用水提法制作健脾解毒方提取物，利用超高效液相-高分辨飞行时间质谱法分析健脾解毒方的主要成分，MTT法检测健脾解毒方对大肠癌细胞增殖的影响，Graphpad Prism5软件计算IC50值，流式细胞术检测细胞周期，Western Blot技术检测Phospho-mTOR、Phospho-P53和P21的蛋白表达。结果健脾解毒方能够抑制大肠癌细胞增殖，处理24、48、72 h后四种大肠癌细胞系的IC50值分别为HCT116(6.894、5.668、3.648 mg/mL)、LoVo(14.65、8.737、7.849 mg/mL)、SW48(8.029、7.026、5.740 mg/mL)及HT29(13.06、9.646、8.448 mg/mL)；健脾解毒方使大肠癌细胞周期阻滞在G1期；并能够下调Phospho-mTOR蛋白表达(P<0.05)，上调Phospho-P53和P21蛋白的表达(P<0.05),使大肠癌细胞周期阻滞在G1期。结论健脾解毒方可能通过mTOR-P53-P21途径抑制大肠癌细胞的增殖，这可能是健脾解毒方治疗大肠癌的作用机制之一。

    健脾解毒方；大肠癌；细胞增殖；半抑制浓度；mTOR

    健脾解毒方为湖南省首届老中医师承导师朱伟光教授治疗大肠癌的有效经验方，全方由黄芪、白术、西洋参、半枝莲、甘草等11味药物组成，具有健脾益气、清热解毒之功，随症加减在临床上取得了很好疗效[1-2]。本研究采用水提法制作健脾解毒方，利用超高效液相-高分辨飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)法分析健脾解毒方的主要成分，应用MTT法、流式细胞术、Western Blot等技术，探讨健脾解毒方对大肠癌HCT116、LoVo、SW48及HT29细胞增殖的影响，并进一步探讨其可能的作用机制，为健脾解毒方治疗大肠癌的临床推广应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器 ......