肖玉洁，王 婷，黄立中*，杨 珊，周思春

    (1.湖南中医药大学中西医结合学院，湖南 长沙 410208；2.株洲市中心医院，湖南 株洲 412007)

    黄芩苷通过上调miR-126诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

    肖玉洁1，王 婷2，黄立中1*，杨 珊1，周思春1

    (1.湖南中医药大学中西医结合学院，湖南 长沙 410208；2.株洲市中心医院，湖南 株洲 412007)

    目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-231，观察黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 用qRT-PCR检测miR-126的表达变化，Western-blot检测Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、p-p38和p53的表达，MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miR-126在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达比正常乳腺细胞低，黄芩苷干预乳腺癌细胞后miR-126上调最为明显(P1 材料和方法

    1.1 材料与试剂

    人乳腺癌细胞株MDA-MB-231购自中南大学湘雅医学院中心实验室细胞库，正常乳腺细胞株Hs 578Bst购自上海拜力生物科技有限公司(均由美国标准生物制品收藏中心ATCC制备)。黄芩苷购自中国药品生物制品检定所，质量分数98.5%，产品批号：120608-201113。pMIR-REPORTTM质粒购于美国Ambion公司。兔抗人Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、p53、p-p38单克隆抗体，山羊抗兔二抗，上海研晶生化试剂有限公司。

    1.2 主要仪器

    二氧化碳培养箱(Heracell)：德国Heraeus公司。倒置显微镜(XDS-1B)：重庆光电仪器总公司。流式细胞仪(BD FACS Canto II)：美国BD公司。凝胶成像分体系统(GBOX-HR)：英国SYNGENE公司。PCR仪(2400 PCR system)：Perkin Elmer公司。荧光定量PCR仪(CFX96TOUCH)美国BIO-RAD公司。

    1.3 方法

    1.3.1 细胞培养 乳腺癌细胞株MDA-MB-231及正常乳腺细胞株Hs 578Bst培养于DMEM培养基中(含10%小牛血清、青霉素100 U/mL和链霉素100 U/mL)，37℃，100%湿度、5%CO2培养箱中培养，贴壁生长，每间隔3天更换培养液，0.25%胰蛋白酶消化传代。取对数生长期的细胞用于进一步的实验。

    1.3.2 药物制备 将黄芩苷干粉充分溶解于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide ......