吴梦华,董建勇*

    (1.浙江大学医学院附属儿童医院,浙江 杭州 310000;2.温州医科大学,浙江 温州 325000)

    斑马鱼胚胎急性毒性实验法检测赶山鞭化学成分胚胎发育毒副作用

    吴梦华1,董建勇2*

    (1.浙江大学医学院附属儿童医院,浙江 杭州 310000;2.温州医科大学,浙江 温州 325000)

    目的 利用斑马鱼胚胎急性毒性实验检测赶山鞭化学成分胚胎发育毒副作用。方法 以孵育6 h的斑马鱼胚胎为实验模型，设DMSO对照组和quercetin,rutin,hyperin,quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside五种赶山鞭单体化合物样品组，观察记录72 hpf(受精后72小时)时的致死率、致畸率、孵化率。结果 72 hpf,在各浓度梯度范围内，5种化合物对斑马鱼胚胎致死致畸抑制孵化效应明显(P<0.05)，高浓度时愈加明显(P<0.01)，且呈现一定的剂量依赖效应。畸形类型主要为心房囊水肿、体节弯曲。结论 上述5种化合物可能对胚胎发育有一定的毒性。

    赶山鞭;斑马鱼胚胎;急性毒性

    赶山鞭系藤黄科金丝桃属植物Hypericum attenuatum的全草。该属植物在我国分布广泛，有抑制血管、抗抑郁、抗病毒等药理作用[1]，有光敏性皮炎、眩晕、疲乏等毒副作用[1]。关于该属植物的有效活性成分研究较多，但是关于其导致毒副作用的化学成分研究较少。传统毒理学研究多数是以小鼠为模型评估药物毒性[2]，但成本高、周期长、结果不易观察。近年来，因斑马鱼与人类各器官系统极其相似[3]、周期短、胚胎透明易观察、对毒性物质反应灵敏[4]等优点，逐渐作为新模型应用于药物毒性评价[5],本文通过对斑马鱼胚胎的急性毒性观察，初步检测赶山鞭导致胚胎发育毒副作用的化学成分。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    斑马鱼(无病原体AB品系，由美国Oregon州立大学提供),饲养在专用的循环系统中，水温28℃，鱼室光周期设定为14 h光/10 h暗。早晚各一次饲喂丰年虫(Artemien,Salina)，中午辅以商品鱼饲料。实验前挑选健康性成熟的斑马鱼放入孵化箱中，每个孵化罐中的雌雄比例保持为2∶1，次日亮灯后半个小时即可收集胚胎。使用系统水将胚胎冲洗干净，弃掉成鱼粪便等杂质，以及未受精和发育不良的胚胎(呈白色不透明状)。将剩余胚胎置于培养皿中加入胚胎培养液，放入28℃、光周期14 h光/10 h暗的光照培养箱中培养 ......