2.3 标本采集

    于实验第38天药物治疗结束后4 h，称质量并2%戊巴比妥(35 mg/kg) 腹腔注射麻醉，将麻醉后的大鼠仰卧固定于鼠板，胸部皮消毒后切开胸部暴露肺部，沿肺门剪下右肺，经PBS漂洗后，取副叶、后叶4 ℃下固定2 h，进行石蜡包埋及切片，片厚5 μm;前叶浸在RNA later保存液中，-80 ℃保存，留作RT-PCR检测;中叶放入3 mLEP管中，-80 ℃保存，备用。

    2.4 标本检测

    2.4.1 RT-PCR检测Nrf2、？酌-GCSmRNA表达 称取大鼠肺组织100 mg按照说明书提取RNA，测量RNA的纯度，取1 μL总 RNA用DEPC水稀釋100倍，放于酶标仪测定 OD26O、OD280 值。按照RT-PCR试剂盒说明书将RNA反转录成cDNA，取上述反应产物2 μLcDNA，其中加入上下游引物各1.5 μL;TaqDNA聚合酶混合物8 μL;ddH2O 7 μL。反应条件：预变性：95 ℃ 4 min;变性：温度94 ℃ ......