中草药日本鸢尾内生真菌的分离及其初步鉴定(2)
2 结果2.1 消毒效果的检测
把最后一遍冲洗水涂布在PDA培养基上,放置于28 ℃恒温培养箱中培养7 d,无菌落长出。同时将已经灭菌的根茎叶压入PDA培养基中,使样品与培养基紧密接触20 min,移去灭菌植物样品,同样放置在28 ℃恒温培养箱中培养7 d也未观察到真菌生长。以上结果充分证明,经过严格的表面消毒程序后,附着在植物表面的菌类已经被彻底消除,分离得到的菌株来自于植物体内部,属于内生真菌。
2.2 日本鸢尾内生真菌的分布和分子生物学鉴定结果
从日本鸢尾的根、茎、叶中共分离纯化出5种20株内生真菌,分别为橘青霉、尖孢镰刀菌、肉色隔孢伏革菌、首都叶点酶(有性形为球座菌属(Guignardia))和小新壳梭孢菌。菌落特征和显微特征描述见表1,分子鉴定结果见表2。通过基于测序结果将内生真菌ITS序列在NCBI数据库中进行BLAST比对后,收集同源性比较高的比对序列,通过邻接法构建系统发育树,其同源性分别是:R1为100%;R2为100%;R3为84%,R4为87%;R5为64% ......
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