2.5.3 碱性磷酸酶染色 取第3代细胞，6×103/L细胞浓度接种于24孔板上，细胞贴壁后开始试验，培养第7天弃培养液，按碱性磷酸酶试剂盒说明书进行偶氮偶联法对成骨细胞进行染色，测定其碱性磷酸酶活性。

    2.6 免疫组化法检测OSX和OPN蛋白

    将添加了含药血清的成骨细胞按通用型SABC试剂盒说明书操作，分别滴加OSX和OPN一抗抗体，37 ℃ 80 min，PBS冲洗3次，每次2 min;添加二抗，37 ℃ 20 min，PBS冲洗3次，每次2 min;滴加SABC，37 ℃ 20 min，PBS冲洗4次，每次5 min;添加DAB显色剂，显色后染成棕黄色为阳性结果。200倍光镜下用显微摄像系统随机选取5个不同视野，通过图像分析系统，选取阳性面积来评估阳性表达细胞面积占总细胞面积的百分比，最后取五个视野的平均值，即为OSX和OPN蛋白的阳性表达率。

    2.7 统计学分析

    用SPSS 20.0进行统计分析袁实验数据以“x±s”表示，各组数据进行方差齐性检验，如方差齐，组间差异采用单因素方差分析;如方差不齐，用秩和检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

    3 结果

    3.1 成骨细胞的鉴定

    3.1.1 成骨细胞的一般形态学观察 倒置显微镜下观察 ......