1.5.3 Western-blot分析心肌组织HCN4蛋白表达 随机选取的6只大鼠，准确称取其100 mg左心室游离壁组织后加入内含1 mmol/L PMSF 的RIPA细胞裂解液1 mL进行裂解离心10 min，12 000转/min。收集含有组织总蛋白的上清液待测。使用DS-PAGE凝胶配制试剂盒(碧云天生物技术公司)配制凝胶后以1∶200的比例用一抗稀释液稀释后4 ℃缓慢摇动，过夜孵育后分别加入洗涤液洗3次，每次10 min;用二抗稀释液稀释(比例为1∶10 000)辣根过氧化物酶来标记二抗，室温孵育2 h后分别加洗涤液洗涤3次，每次10 min。以ECL发光试剂盒检测心肌组织HCN 4蛋白表达后以凝胶成像分析系统做分析检测。

    1.6 统计学处理

    数据以“x±s”来表示，采用Graphpad Prism 6软件进行统计分析及绘制统计图表。计量资料用单因素方差分析(One-wayANOVA)，组间比较选择Tukey's multiple comparisons test检验有无统计学意义的P值 ......