1.2.5 荧光素酶报告质粒的构建 通过PCR扩增含有miR-483与CREB1结合位点上下游800 bp序列的CREB1基因片段到Renilla psiCHECK-2载体下游，并命名为wtCREB1荧光素酶报告质粒。其后在此基础上设计相应的引物对结合位点进行突变(见表1)，得到mutCREB1荧光素酶报告质粒。

    1.2.6 LUC实验 取对数生长期的NP细胞接种于24孔细胞培养板，培养12 h后，转染wt/mut CREB1荧光素酶报告质粒，同时分别转染miR-483 mimics及mimics NC，再培养48 h后，使用LUC检测试剂盒测定各组细胞中的荧光素酶相对活性。

    1.3 数据统计分析

    本实验所有数据均由统计软件SPSS 20.0分析处理，最终数据为3次平行重复实验的x±s，格拉布斯准则去除逸出值后，两两比较，先进行方差齐性Levene检验，若方差齐，采用LSD-t检验 ......