基于艾灸温通理论探讨艾灸内关穴预处理对大鼠MIRI 保护机制的研究
心肌细胞,1材料与方法,1实验动物及分组,2主要仪器与试剂,3模型制备,4穴位定位,5艾灸方法,6检测指标及方法,7Westernblot检测心肌细胞中Bcl-2,HIF-1α,Caspase
黄 河,王 晶,方 园,刘 密,2,常小荣*,冯 芳*(1.湖南中医药大学针灸推拿学院,湖南 长沙410208;2.浏阳市中医医院,湖南 浏阳410300;3.郴州市第一人民医院西院,湖南 郴州423000)
冠心病是临床高死亡率疾病之一,临床多采用药物、介入、外科手术等来改善冠状动脉血供、降低心肌耗氧量,但各种血运重建手段在恢复心肌供血供氧时可同时导致心肌细胞损伤甚至坏死,即心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI),导师常小荣教授在课题组多年灸法研究的基础上,提出艾灸的温热刺激具有温通、温补效应这一学术思想[1-2],其中,“温通”即“以温促通”,“通”具有通畅、通达、通调等含义,艾灸温通效应可以产生人体气血运行通畅的效应,即借助灸火的热力作用于机体特定腧穴或部位,通过疏通经络使气血运行通畅,最终正气得复而邪气得去,与《灵枢·经水》提出的“十二经之多血少气……与其皆少血气……其治以针艾,各调其经气”一致,即艾灸的温通效应具有通调机体各经气血的作用。
国外研究证实局部热刺激可有效减少心肌缺血梗死面积[3-4],国内一项研究表明艾灸内关穴预处理对MIRI 大鼠心肌细胞具有保护作用[5],由于内关穴主治心脏疾病及经脉循行部位的其他疾病[6-7],对治疗心脏疾患具有特异性,且课题组前期研究也证实[8-11]:选用内关穴电针可增加心肌组织内源性保护物质活性和含量,同时减少相关物质的释放以促进MIRI心肌组织形态和超微结构修复,最终对MIRI 大鼠心肌产生保护作用。而心肌细胞中B 细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在MIRI 中具有重要作用,故本研究以此展开,以MIRI 大鼠为实验对象,探讨艾灸内关穴预处理对大鼠MIRI 的预保护作用是否与心肌细胞中Bcl-2、HIF-1α 及Caspase-3 的变化有关,为艾灸温通理论对MIRI 的保护机制提供进一步实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组
40 只SD 大鼠(SPF 级)由湖南中医药大学动物实验中心提供,动物合格证号:SCXK(湘)2011-0003,体质量250~350 g,雌雄各半。 所有大鼠适应性喂养7 d 后随机分为4 组,每组10 只,即:正常组、模型组(MIRI 模型)、艾灸5 d 组(艾灸内关5 d+MIRI 模型)、艾灸10 d 组(艾灸内关10 d+MIRI模型) ......
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