郑慧娥，何灏龙，陈芯仪，田浩梅，陈楚淘*

    (湖南中医药大学针灸推拿学院，湖南 长沙410208)

    脑血管病又称脑中风、脑卒中等，已成为全球主要致残致死原因之一，主要分为出血性脑血管病和缺血性脑血管病，其中缺血性脑血管病的发病率可高达80%左右[1]。 临床上应对缺血性脑血管病的常用手段即在时间窗内及时溶栓以期恢复缺血区域的血流再灌注，控制梗死范围[2]。 而血流的再灌注如同一把双刃剑，在控制梗死范围持续扩大的同时，也势必引起一系列病理级联反应，恶化缺血半影区，造成脑组织水肿、神经元损伤等[3]，此即脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)。 因此，探究控制CIRI 的治疗方法及治疗靶点对提高缺血性脑卒中的救治将有重大意义。研究发现，miRNA可调控CIRI 的相关机制，如神经发生、炎症反应、氧化应激、脑水肿形成及细胞凋亡等[4]，可见miRNA对CIRI 病理进程影响重大。 近年来，针刺调控CIRI伤方面卓有成效，但主要是围绕干预神经血管再生、氧化应激损伤、细胞凋亡、细胞自噬及炎性因子等方面展开研究[5-7]，而从基因层面整体综合探讨针刺抗CIRI 机制鲜见报道。

    故本研究拟以miRNA 为视角，观察针刺对CIRI大鼠神经功能、脑梗死面积比及脑组织海马区miRNA 的影响，探究针刺促CIRI 修复的作用机制，以期丰富针刺调控CIRI 机制，为中医针灸临床、教学等提供理论支撑。

    1 材料与方法

    1.1 动物与分组

    SPF 级雄性SD 大鼠60 只，体质量250～280 g。于湖南斯莱克景达实验动物有限公司购买，合格证号：SCXK(湘)2013-0004。饲养于湖南中医药大学实验动物中心，饲养条件：室温22～25 ℃，湿度60%左右，12 h∶12 h 的昼夜交替周期。予自由进食进水适应性饲养7 d 后，参照随机数字表随机分为正常组、假手术组(Sham 组)、CIRI 组、CIRI+针刺组，共4组，每组15 只。

    1.2 主要试剂和仪器

    华佗牌0.30 mm×25 mm 无菌针灸针(苏州医疗用品厂有限公司)；线栓(北京西浓科技有限公司)、水合氯醛(天津科密欧化学试剂公司)；青霉素(江西科达动物药业有限公司)；TTC 溶液(江苏维尔生物科技有限公司)；多聚甲醛(江苏维尔生物科技有限公司)；miRCURYTM 芯片标记试剂盒(丹麦Exiqon 公司)；miRNAs 芯 片(丹 麦Exiqon 公 司)；BL-2000 图象分析(上海康为医疗科技发展有限公司)；Genepix 4000B 扫描仪(美国Affymetrix 公司)；引物(上海生工生物工程技术服务有限公司)；逆转录试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)；SYBRGREEN PCR Mix(美国Applied Biosystems 公司) ......