麻葶舒喘汤对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响及机制研究
1材料,1实验动物,2主要试剂,3主要仪器,4实验药品,2方法,1造模,分组及用药,2小鼠行为学观察,3气道酚红排泌实验,4取材,5HE染色观察肺组织病理形态变化,6气道黏膜杯状细胞PAS染色及杯状细胞计数
刘 敏,张才圣,柏正平,3*(1.湖南中医药大学,湖南 长沙410208;2.湖南省中医药研究院附属医院,湖南 长沙410006;3.湖南省中医药研究院,湖南 长沙410006)
哮喘是一种慢性炎症性呼吸道疾病,是目前全球发病率较高的呼吸道疾病之一,严重影响人们的健康生活[1]。黏液高分泌是其最为关键的病理特征,也是导致哮喘患者死亡的最主要因素[2]。Akaba 等[3]研究表明,哮喘中黏液过度分泌的原因在于气道杯状细胞增生,分泌过量的黏蛋白。 其中,黏蛋白5AC(MUC5AC)是支气管哮喘患者体内含量最丰富的黏液蛋白[4],豆蔻酰化富丙氨酸激酶C 底物(MARCKS)为诱导气道黏液蛋白过度分泌的关键作用因子[5]。
目前,常用于缓解哮喘的药物为糖皮质激素类及β 受体激动剂等药物[6-7]。但临床运用上发现,中药对于防治支气管哮喘也有较好的疗效[8]。哮喘属于中医学“哮病”范畴,多见于中老年人,临床以风哮证多见,主要病机为风盛痰阻、气道挛急[9]。 麻葶舒喘汤是湖南中医药大学柏正平教授治疗支气管哮喘的临床经验方,具有止咳、平喘、祛痰的功效,对于哮喘-风哮证的临床疗效显著且安全性强,但其具体的作用机制尚不清楚。 因此,本研究探讨麻葶舒喘汤对支气管哮喘模型小鼠气道黏液蛋白的干预作用,为麻葶舒喘汤进一步临床推广应用提供实验依据。
1 材料
1.1 实验动物
清洁级雌性BALB/C 小鼠60 只,6~8 周龄,体质量范围21~29 g,由湖南省中医药研究院动物实验中心提供,许可证号:SCXK(湘)2016-0002。 实验动物环境:小鼠分笼饲养,室温18~20 ℃,湿度65%~70%,自由饮水进食。 适应环境7 d 后开始实验。
1.2 主要试剂
HE 染色试剂盒(GP1031,武汉赛维尔生物科技有限公司);PAS 染色试剂盒(GP1039,武汉赛维尔生物科技有限公司);Super ECL Plus 超敏发光液(32109,美国Thermo pierce 科技有限公司);HiFi-Script cDNA 第一链合成试剂盒(CW2569,北京康为世纪生物科技有限公司);BCA 蛋白浓度测定试剂盒(P0010S,上海碧云天生物技术有限公司);RIPA 裂解液(CW2333,北京康为世纪生物科技有限公司);TrizolTMPlus RNA 纯化试剂盒(12183555,美国Invitrogen 生命技术有限公司);鼠抗MUC5AC(MA1-21907 ......
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