李腾辉，董一昕，闫凤娜，王淑艳，王珊珊，于 雪，王 旭，许明阳，李卫红*

    (1.北京中医药大学中医学院，北京100029；2.首都医科大学附属北京地坛医院，北京100020)

    中医学认为气是构成人体和维持人体生命活动的最基本物质，人体的精微物质血、津液和精等均由气所化生[1]。气通过推动、温煦作用，对人体的生长发育以及各脏腑组织器官的生理活动均具有激发和促进作用[2]。线粒体通过氧化磷酸化过程合成ATP，为细胞的各种生命活动提供能量，是人体“动力工厂”。当线粒体功能障碍时，机体会出现“气虚”的相关症状。由于中医“气”和线粒体在功能和病理表现上的高度一致性，有学者提出了“气-线粒体”相关学说[3-4]，提示改善线粒体损伤可能是补气药物发挥疗效的内在机制。

    中枢神经系统代谢旺盛，能量需求高，神经细胞线粒体含量丰富[5]。线粒体是除了动物细胞核之外唯一含有DNA 的细胞器，但由于线粒体DNA(mtDNA)缺乏组蛋白的保护，极易受到氧自由基等因素损伤发生缺失突变，导致线粒体能量代谢功能异常[6]。因此，本实验采用具有神经细胞特征的PC12 细胞，通过建立mtDNA 部分缺失细胞模型，观察补中益气汤对线粒体损伤的作用及其内在机制，为揭示中医“补气”疗法的生物内涵提供实验依据。

    1 材料

    1.1 药物

    补中益气汤：黄芪15 g，炙甘草15 g，人参9 g，当归6 g，陈皮6 g，升麻6 g，柴胡6 g，白术9 g，均购自北京同仁堂。补中益气汤母液制备：将补中益气汤饮片加适量水浸泡0.5 h，煎煮两次，合并两次药液浓缩至含生药315 mg/mL 的母液，过滤除菌4 ℃保存备用。 达纳康母液制备：达纳康作为阳性对照药，制备成总有效成分0.4 mg/mL 的母液，4 ℃保存以备用。

    1.2 细胞

    PC12 细胞(大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株)购自北京协和细胞库。

    1.3 主要试剂与仪器

    DMEM、胎牛血清(Gibco 公司)；马血清(拜尔迪公司)；溴化乙锭(兰博利德公司)；丙酮酸、尿嘧啶(Sigma 公司)；CCK8 试剂盒(碧云天公司)；线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅳ活性检测试剂盒(索莱宝公司)；ATP 检测试剂盒(碧云天公司)；DNA 提取试剂盒(艾科瑞公司)；RNA 检测试剂盒(艾科瑞公司)。

    实时荧光定量PCR 仪(美国Bio-Rad 公司)；CO2培养箱(德国Eppendorf 公司)；酶标仪(美国BioTek公司) ......