“风寒湿”外邪影响Th17/Treg失衡促进类风湿关节炎病证发生的分子机制研究
张逢,戴宗顺,林也,蔡雄,宋厚盼,陈聪,廖菁


〔摘要〕 目的 探討Th17/Treg细胞在类风湿关节炎(痹证)中的表达情况及“风寒湿”外邪影响痹证发生的分子机制。方法 (1)雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、单纯佐剂性关节炎(AIA)组和AIA风寒湿痹组,每组30只。正常对照组和单纯AIA组大鼠正常饲养;AIA风寒湿痹组每天置于人工智能气候箱内接受风寒湿刺激,14 d后单纯AIA组和AIA风寒湿痹组免疫含有热灭活结合杆菌的完全弗氏佐剂(CFA);AIA风寒湿痹组CFA免疫后风寒湿再刺激6 d。各组动物CFA免疫前1天、免疫后第6、10天,分离外周血单核细胞(PBMCs),流式细胞术检测CD4+Th17和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞,分析Th17/Treg细胞比例。(2)雄性SD大鼠20只,随机分为正常对照组和AIA风寒湿痹组,每组10只。正常对照组和AIA风寒湿痹组大鼠的实验条件同(1)。CFA免疫后第14天麻醉大鼠,分离PBMCs,流式细胞术检测外周血CD4+T细胞pSTAT3蛋白、CD4+IL-17+淋巴细胞pSTAT4和pSTAT6的蛋白平均荧光强度,RT-PCR检测外周血CD4+T细胞中RORγt、Foxp3、STAT3、STAT4、STAT6 mRNA的表达。结果 随着AIA风寒湿痹大鼠病情的进展,外周血CD4+Th17细胞比例逐渐增加,CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例逐渐降低,与同时间点单纯AIA组大鼠比较,差异具有统计学意义(P0.05) ......
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