黄 勇，董克芳，*，王 凡，杨强健

    (1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005)

    骨质疏松症是一种常见的慢性骨骼疾病，主要表现为骨量降低、骨小梁结构破坏、骨脆性增高，从而导致全身多处骨折[1]。 其机制主要是成骨分化减少和破骨分化增加，引起骨量的流失[2]。 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)可分化为成骨细胞，促进其成骨分化，提高骨量，是防治骨质疏松症的关键因素[3]。 骨质疏松症患者以老年人居多，机体的衰老在体内表现为细胞的衰老，导致细胞增殖和分化能力衰退。 因此，寻找可以促进成骨分化的方法诱导衰老BMSCs 向成骨细胞分化，是治疗骨质疏松症的重要研究方向。 临床上，与西药相比，中医药具有疗效好、安全性高和不良反应少等优势[4]。 健骨二仙丸是萧劲夫教授根据骨质疏松症的病因病机以及多年的临床经验创制，是由龟鹿二仙胶加续断、山药组成的经验方，并有研究证实，健骨二仙丸能有效促进成骨细胞增殖和分化，防止成骨细胞凋亡[5]。 而金匮肾气丸、六味地黄丸均是温补肾精的经典方剂，在治疗骨质疏松症等疾病方面具有显著的临床疗效[6-7]。 故本实验采用健骨二仙丸、 金匮肾气丸和六味地黄丸体外干预衰老BMSCs，研究其对衰老BMSCs 成骨分化过程中Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ, COL Ⅰ)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)表达的影响，以期探讨3 种补肾方治疗骨质疏松症的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    SPF 级SD 雄性大鼠40 只，体质量(100±10) g，由湖南中医药大学动物实验中心提供，动物生产许可证号：SYXK(湘)2019-0004，实验操作均在湖南中医药大学动物实验中心完成，动物使用许可证号：SYXK(湘)2019-0009。

    1.2 主要药物、试剂与仪器

    健骨二仙丸由龟板、鹿角胶、党参、枸杞子、续断、山药按1∶1∶3∶6∶6∶6 比例组成，共345 g；金匮肾气丸由干地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮、桂枝、附子按8∶4∶4∶4∶3∶3∶1∶1 比例组成，共81 g；六味地黄丸由熟地黄、山药、山茱萸、泽泻、茯苓、牡丹皮按8∶4∶4∶4∶3∶3 比例组成 ......