余晓愉，熊 辉*，齐新宇，向黎黎，曾 朋，张 娟

    (1.湖南省胸科医院，湖南 长沙 410005；2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；3.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005；4.湖南中医药大学湘杏学院，湖南 湘阴 414600)

    膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)是在生物学和力学等各种因素的影响下，致使膝关节软骨细胞、 细胞外基质及软骨下骨三者结构和功能失衡所引起的一种临床常见的退行性病变[1-3]。 随着经济的进步、 人的预期寿命增加及超重等原因，KOA 的患病率逐年增加，65 岁以上者发病率达50%以上，已成为中老年人慢性疼痛和下肢残疾的主要原因之一[4]。 不仅导致患者个人的生活质量下降，且增加了社会的经济负担。 “以方测证”的原理是依据方剂的药物构成及功效，观察应用该方剂后所出现的药效反应，从而推测研究对象的所属证型，是中医学认识病证、用于证候动物模型研究的一种重要方法[5]。 近年来，许多学者从不同角度对KOA 进行了研究， 当前关于KOA 的研究主要以临床观察为主，其实验研究尚不全面，关于KOA 病症结合模型的研究较少[6]。 本实验基于“以方测证”思维，模拟人KOA风寒湿痹证的发病机制，以期建立稳定的KOA 病证结合动物模型，为KOA 发病机制的研究提供便利条件。

    1 材料

    1.1 动物

    健康SPF 级雄性SD 大鼠50 只，体质量(180±5) g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物质量合格证号：430727201101634326。 分笼饲养于湖南中医药大学科技创新实验动物中心，室内温度20～25 ℃，湿度50%～70%，昼夜各12 h，使用许可证号：SYXK(湘)2019-0009。 本实验符合动物伦理委员会要求，湖南中医药大学伦理委员会审批号：LL2020120203。

    1.2 药物与试剂

    乌头汤按《金匮要略》原方比例制备。 制川乌6 g、麻黄9 g、白芍9 g、甘草9 g 均购自亳州市京皖中药饮片厂(批号分别为201001、211001、200101、210102)，黄芪9 g(湖南聚仁中药饮片有限公司，批号：21051801)。

    木瓜蛋白酶(上海源叶生物科技有限公司，批号：P15J11B118475)；水合氯醛(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：Q/12HB4218-2017)；4%多聚甲醛(广州赛国生物科技有限公司，批号：70111800)；鼠肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)、鼠白细胞介素-17A(interleukin-17A, IL-17A)、 鼠白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)ELISA试剂盒均购自上海泛柯实业有限公司(批号分别为21022535N、21022531N、21022526N) ......