胡锦洋，蒋士生*，牛俊杰*

    (湖南省中西医结合医院，湖南 长沙 410006)

    溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种机制不明的炎性肠病，极易复发，常迁延难愈[1]。 近年来病理生理学概念认识到肠道菌群在UC 发生发展进程中扮演重要角色，对UC 患者粪便进行菌群检测证实存在明显肠道菌群失调，其生物多样性及丰度减少，肠道菌群失调与肠道炎症相关疾病密切相关[2]。 肠道菌群可通过Toll 样受体的介导过程上调抗炎细胞因子和减少促炎细胞因子，进而调控肠道黏膜免疫系统[3]；同时，正常的肠道菌群可与肠黏膜结合形成生物屏障，拮抗病原微生物及肠毒素的入侵。 芪连结肠宁有益气健脾、清热祛湿的功效，由全国名老中医药专家蒋士生教授所创，对于UC 的治疗收效甚好。本研究旨在通过检测UC 模型大鼠血清及结肠组织中Toll 样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)、核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)p65、白介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达和粪便中肠道菌群多样性及优势物种丰度，探讨芪连结肠宁治疗UC 的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物

    SPF 级雄性SD 大鼠40 只，体质量160～200 g，购自湖南斯莱克景达实验动物中心，许可证号：SYXK(湘)2021-0008。 饲养条件：昼夜各12 h 明暗交替，室温22～28 ℃，相对湿度60%，噪声≤80 dB。实验动物饲养于湖南中医药大学动物实验中心，并完成相关伦理审查，动物实验伦理审查号：2021-0088。

    1.2 主要药物、试剂及仪器

    芪连结肠宁组成：黄芪15 g、人参15 g、炒白术15 g、茯苓15 g，陈皮10 g、黄连10 g、干姜6 g、蒲黄10 g、蒲公英15 g、败酱草15 g、椿皮10 g、木香10 g、白芍15 g、甘草5 g，药物浸泡于蒸馏水中40 min，第一煎大火煮沸后，小火煎煮30 min；第二煎大火煮沸后，小火煎煮20 min，最后将2 次煎煮汤药混合浓缩制成含生药2.48 g/mL 的药液。 所有中药材均购于湖南省中西医结合医院中药房，4 ℃冰箱中保存，使用前预热。

    TRIzol 试剂(美国Thermo 公司，批号：10296010)；兔IgG-免疫组织化学试剂盒、HRP-羊抗兔IgG、抗GAPDH 抗体均购自武汉博士德公司(批号分别为15H-1L16F0334、BST15H06A15H65、BST14H06A18G11)；抗NF-κB p65 抗体、抗TLR4 抗体均购自英国Abcam公司(批号分别为ab22048、ab32536)；NF-κB p65、TLR4、IL-6、TNF-α ELISA 试剂盒均购自美国Proteintech 公司(批号分别为55030、55131、53027、55011)；伊红染液、苏木素染液均购自武汉赛维尔生物科技有限公司(批号分别为ZH201285、ZH209148) ......