王华帅，谢 彪，罗 敏，何永恒*

    (1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南省中医药研究院附属医院肛肠科，湖南 长沙 410006；3.湖南中医药大学第二附属医院肛肠科，湖南 长沙 410005)

    结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，也是世界上第三大最常见的恶性肿瘤[1]。据统计，2018 年全球新发癌症病例总数为1810 万例，癌症死亡人数为960 万人，其中，结直肠癌占总病例的6.1%，占总癌症死亡人数的9.2%[2]。 我国《2019 年全国癌症报告》指出，结直肠癌依然是我国主要的恶性肿瘤之一，仅次于肺癌和胃癌[3]。 国内外研究一致认为，结直肠癌会造成沉重的社会和经济负担[4-5]。 目前，认为其发病涉及肠道菌群、遗传、年龄和表观遗传等因素。现代临床常采用手术、放化疗等方法治疗结直肠癌，但术后患者面临着生存质量低、复发转移率高、药物抵抗等困扰，而中医药治疗结直肠癌具有抗复发转移、提高免疫力、减轻放化疗不良反应及延长生存周期等独特优势[6-7]。

    天马颗粒是由何永恒教授结合化痞膏、黄芪益损汤、内消瘰疬丸三方化裁而成，具有“拔癌毒，消结肿，通经络，止疼痛”功效，契合中医治疗结直肠癌中“攻、解、化、散、托”法的科学内涵。 在临床使用中，天马颗粒能有效改善中晚期结直肠癌患者的全身状况和生存质量，延长患者术后5 年生存期，抑制大肠癌术后局部复发[8-11]。在方药组成、质量标准、用药安全等方面不断研究、改进[12-16]，现天马颗粒已获得专利[17]。

    小鼠Friend 病毒综合因子1(friend leukemia integration 1, FLI-1)在结肠癌细胞中表达低于正常肠上皮细胞，其过表达可正向调控Klotho 蛋白表达，抑制结肠癌细胞增殖[18]。本实验在前期研究基础上，以HCT116 细胞为研究对象，基于FLI-1/Klotho通路，探究天马颗粒对结直肠癌细胞增殖的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    人结直肠癌细胞株(HCT116)购买于武汉普诺赛生命科技有限公司，批号：CL-0096；8 周龄SD 雄性大鼠10 只，体质量(200±20) g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物质量合格证：43072720110-1275856，伦理编号：LLBH-202010130001。

    1.2 血清制备

    使用10 只SD 雄性大鼠制备天马颗粒血清。 按照人-动物体表面积关系换算出大鼠每天中药等效剂量1.86 g/kg ......