王理槐，窦 娴，陈 晟，彭慧婷，何 晓，李涵予，杨 晓，刘 华，孙银辉*

    (1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)

    流行病调查数据显示，恶性肿瘤目前已是危害我国人民健康的最主要影响因素之一[1-2]。在恶性肿瘤进展过程中，癌症恶病质(cancer cachexia, CC)成为恶性肿瘤中晚期的常见并发症，发病率为60%～80%，死亡率则高达80%，已成为晚期癌症患者的直接死因之一[3-4]。 现代医学营养支持只能在一定程度上缓解CC，总体疗效欠佳。目前，有研究认为内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)与CC 骨骼肌萎缩密切相关[5]。适度的ERS 时，内质网应激相关性降解(endoplasmic reticulum associated degradation, ERAD)通路被激活，有利于细胞恢复内环境稳态和维持存活，但持续或高强度的ERS 将激活内质网应激性凋亡(endoplasmic reticulum stress induced apoptosis, ERSIA)途径导致细胞凋亡[6]。 越来越多的实验证明，内质网相关降解蛋白1(Derlin-1)的表达与ERS 关系密切，是调控细胞ERSIA 的关键点[7-11]。CC 属于中医学“虚劳”范畴，久病导致气血阴阳俱虚，以脾肾不足为主，本着“虚则补之、损则益之”的治则，CC 的治疗当着重脾肾双补、气血同调[12-13]。 本课题组运用湖南中医药大学第一附属医院院内制剂扶正口服液治疗CC，疗效满意并对其机制进行了初步探索。 本研究以Derlin-1 介导的ERAD-ERSIA通路为研究切入点，通过体外培养小鼠成肌细胞(C2C12)并使用小鼠结肠癌细胞(CT26)代谢液制备C2C12萎缩模型，给予扶正口服液含药血清干预，从细胞、分子水平，初步探究扶正口服液改善CC 的可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及动物

    C2C12(品系：C3H，批号：CL-0044)细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司；CT26(品系：BALB/c；批号：CL-0071)细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司；BALB/C 小鼠40 只购自长沙市天勤生物技术有限公司，雄性，许可证号SCXK(湘)1019-0014，体质量25～30 g，鼠龄8 周。

    1.2 主要试剂与仪器

    1.2.1 主要试剂 总RNA 提取试剂盒(批号：R1200)、BCA 蛋白浓度测定试剂盒(批号：PC0020)、30%制胶液(批号：A1010)均来自索莱宝生物技术有限公司；通用逆转录试剂盒(批号：11141ES60)、RT-PCR荧光定量试剂盒(批号：11201ES08)均来自翊圣生物科技有限公司；TEMED(批号：Amresc00761)来自卡迈舒(上海)生物科技公司；蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(批号：P1045)来自碧云天生物技术研究所；SYVN1(批号：DF12235)、IRE1(批号：DF7709)、XBP1(批号：AF5110)、DDIT3(批号：DF6025)、p-JNK(批号：AF3318)均来自江苏亲科生物研究中心有限公司；Derlin-1(批号：Ab176732)来自艾博抗(上海)贸易有限公司；羊抗兔-HRP(批号：bs-0295G-HRP)来自北京博奥森生物技术有限公司；扶正口服液(批号：20210518)来自湖南中医医药大学第一附属医院药剂科 ......