唐乃高，李鹏程，翁海勇，董 慧，郑根建

    (海南医学院第一附属医院口腔科，海南 海口 570100)

    口腔癌主要是指口腔鳞状细胞癌，是世界上高度流行和致命的癌症之一，在过去10 年中其发病率和死亡率显著上升[1]。 尽管外科手术、放射治疗、化学治疗和靶向治疗等治疗方式取得了很大的进展，但口腔癌患者的5 年总生存率在过去20 年里并没有明显改善[2]。 甘草素是甘草中重要黄酮类化合物之一，而甘草是我国一种宝贵的中药资源[3]。 据报道，甘草具有调节血管病变、抗肿瘤、改善纤维化、抗炎等多种药理作用，且其不良反应较少[4]。 SCC-15细胞为人舌磷癌细胞，被广泛应用于研究口腔鳞状细胞癌，甘草素能提高人口腔鳞状细胞癌SCC-15细胞放射治疗敏感性， 其作用机制与细胞自噬有关[5]。 因此，探索了解甘草素对口腔鳞状细胞癌的相关作用功能，寻找新的治疗靶点，对判断预后和改善口腔癌具有潜在的治疗意义。

    在多种癌症的发展过程中，微RNA-486-3p(microRNA-486-3p，miR-486-3p)可以通过抑制多种癌细胞的迁移和侵袭，发挥抗肿瘤作用[6-7]。 盘蛋白结构域受体-1(discoidin domain receptor 1, DDR1)是盘蛋白结构域受体亚家族的成员。DDR1 激活后，在胞质结构域的多个酪氨酸残基上自磷酸化，并将信号传递到细胞[8]。DDR1 的异常表达和激活已在多种人类癌症中被报道，如肺癌、乳腺癌、口腔癌和肝癌[9]。 与许多其他受体酪氨酸激酶一样，失调的DDR1在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用，如生存、增殖、黏附、迁移、转移、上皮-间叶细胞转化和耐药等[10]。

    本研究拟通过实验阐明甘草素对口腔鳞状细胞癌SCC-15 细胞的作用及对相关机制进行初步探讨，明确miR-486-3p 与DDR1 的相互作用关系，对miR-486-3p 在口腔癌中的作用及为临床口腔鳞状细胞癌选择用药提供参考和实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    SCC-15 细胞购自上海酶研生物科技有限公司(批号：CC-Y1639)，使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，置于37 ℃含5% CO2的培养箱中进行培养。

    1.2 主要试剂和仪器

    5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU)溶液(江苏凯基生物技术股份有限公司，批号：KGA331)；甘氨酸、Hoechst 染色液、BCA蛋白浓度测定试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司(批号分别为ST085、C0003、23225)；逆转录酶、TaqMan microRNA 反转录试剂盒、Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂、逆转录试剂盒均购自美国Thermo Fisher 公司(批号分别为18080-044、4366579、13778150、1622)；QuantiTect SYBR Green PCR 试剂盒、Trizol 均购自美国Takara 公司(批号分别为74131、7231)；pmirGLO 双荧光素酶报告基因载体质粒(美国Promega 公司 ......