陈 娟，徐琳本，蒋益兰，翦林宏，曾宏亮，谭小宁*

    (湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410006)

    结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是最常见的恶性肿瘤之一，在全球所有恶性肿瘤的发病率和死亡率中分别位居第3 位和第2 位[1]。研究表明，40%～50%的患者在诊断初期即发现有远处转移，其中无转移者5 年生存率接近90%，而已转移者5 年生存率仅为10%[1]。 肿瘤微环境是肿瘤的生存场所，具有低氧、低pH、炎症、乳酸堆积等特点，在促进肿瘤转移中具有关键作用[2]。 在肿瘤微环境中的巨噬细胞被称作肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAM)，TAM 数量和分型变化与CRC 的发生发展和临床治疗密切相关[3]。 研究证实，M2 型巨噬细胞不但能发挥免疫抑制作用，还能促进肿瘤微环境中的血管生成和基质重塑等，进而促进肿瘤转移[4]。

    健脾消癌方是湖南省名中医蒋益兰教授根据多年的临床经验，结合现代医学知识，根据CRC“脾气亏虚、瘀毒内结”的病机特点，以扶正祛邪为原则，以健脾益气、化瘀解毒为治法而创立，具有显著的临床疗效[5-6]。 本实验在前期研究的基础上，以TAM 作为研究对象，在体外通过将巨噬细胞与人CRC 细胞HCT116共培养的方法来模拟CRC 免疫微环境，探索健脾消癌方拮抗CRC 转移的机制。

    1 材料

    1.1 细胞

    人CRC 细胞HCT116 购于中国科学院上海细胞研究所，目录号TCHu 99；人单核巨噬细胞THP-1购于中国科学院上海细胞研究所，目录号：TCHu 57。

    1.2 药物

    健脾消癌方组成：人参15 g，茯苓15 g，薏苡仁30 g，淫羊藿15 g，白花蛇舌草30 g，石见穿30 g，莪术10 g，郁金15 g，炒枳壳6 g。 选用一级药材，按生药量加入10 倍水，煎煮1 h，保存药液；药渣再加入8 倍量水，煎煮1 h；合并药液，浓缩成近2 倍水量时，放置过夜，去沉淀，继续浓缩成1.5 g 生药/mL备用。

    1.3 实验动物

    雄性SD 大鼠20 只，SPF 级，体质量180～220 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2019-0004，实验动物质量合格证号：43072721110275225，饲养于湖南省中医药研究院屏障环境，实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2020-0008。 饲养环境：温度22～26 ℃、相对湿度50%～70%、12 h/12 h 光暗交替 ......