王华帅，武明胜，李一金，谢 彪，罗 敏，何永恒*

    (1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南省中医药研究院附属医院肛肠科，湖南 长沙 410006；3 湖南中医药大学第二附属医院肛肠科，湖南 长沙 410005)

    结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，也是世界上第三大最常见的恶性肿瘤[1]。据统计，2018 年全球新发癌症病例总数为1810 万例，癌症死亡人数为960 万人。其中，结直肠癌占总病例的6.1%，占总癌症死亡人数的9.2%[2]。 我国《2019 年全国癌症报告》指出，结直肠癌依然是我国主要的恶性肿瘤之一，仅次于肺癌和胃癌。 国内外研究一致认为，结肠癌会造成沉重的社会和经济负担[3-4]。 目前，认为其发病涉及疾病、肠道菌群、遗传、年龄和表观遗传等因素。现代临床治疗结直肠癌常采用手术、放化疗等方法，术后患者仍然面临着生存质量低、复发转移率高、药物抵抗等不良反应，中医药治疗结直肠癌具有抗复发转移、提高免疫力、减轻放化疗不良反应及延长生存周期等独特优势。

    何永恒教授结合化痞膏、黄芪益损汤、内消瘰疬丸三方化裁而研制成天马颗粒，具有“拔癌毒，消结肿，通经络，止疼痛”功效，具备“攻、解、化、散、托”法的科学内涵。 经过多年临床运用及实验研究[5-13]，天马颗粒组方得到不断优化，现已获得专利[14]。前期研究发现，FLI-1 在结直肠癌中是个抑癌基因，其表达受启动子甲基化影响，去甲基化作用后可使其过表达，抑制结直肠癌细胞增殖[15]。DNA 甲基化主要由甲基化转移酶(DNA methyltransferase, DNMT)和S-腺苷甲硫氨酸催化。 而DNMT1、DNMT3a 是DNMT主要组成。 本实验在前期研究基础上，以HCT116、HT29、Caco-2 细胞为研究对象，观察天马颗粒血清对FLI-1 蛋白表达的影响， 探究对FLI-1 启动子甲基化作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞及动物

    人结直肠癌细胞HCT116、HT29、Caco-2 细胞株购自武汉procell 公司，批号CL-0096、CL-0118、CL-0050；8 周龄SD 雄性大鼠20 只，体质量(200±20) g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物质量合格证：430727201101275856，伦理编号：LLBH-202010130001。

    1.2 主要药物及试剂 ......