梁 祺，吴海辉，王珊珊，杨 彤，葛金文，2*

    1.湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南 长沙 410208；

    2.湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410006

    脑缺血是指由于各种原因引起脑血管堵塞导致组织缺血缺氧坏死，出现偏瘫、意识障碍等以神经功能损伤为主的疾病。 脑缺血是一个持续数小时甚至数天的空间以及时间变化的事件，发病机制复杂，自由基损伤、钙超载等许多病理生理过程参与了病程进展[1]。 铁是机体必需的微量元素，参与了氧的转运与利用和髓鞘蛋白合成等过程，与脑发育和代谢等生理过程密切相关[2]。 研究表明，在脑缺血后出现显著脑铁代谢紊乱，铁沉积会导致神经元损伤加重[3]。补阳还五汤是益气活血法的代表方，是中医临床治疗脑缺血的经典方剂。许多研究证明，补阳还五汤对脑缺血的治疗效果显著，能够降低脑缺血后铁沉积[4-6]。本研究通过细胞实验模拟半体内环境，以补阳还五汤为干预药物，探讨补阳还五汤调控脑缺血后铁稳态失衡，改善神经元损伤的作用机制。

    1 材料

    1.1 动物来源

    18 只SPF 级SD 雄性大鼠，体质量200～220 g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号：SCXK(湘)2019-0004，质量合格证号：430727201101237013]。饲养于湖南中医药大学实验动物中心[使用许可证编号：SYXK(湘)2019-0009]。 环境温度(24.0±0.5) ℃，相对湿度50%～60%，自由摄食，昼夜光照，适应性饲养3 d。 本研究经湖南中医药大学实验动物中心伦理委员会审查批准(伦理编号：LL201907230006)。

    1.2 细胞来源

    大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12 细胞株，购自中国科学院上海细胞库，货号：TCR9。

    1.3 药物制备

    补阳还五汤药物组成：生黄芪120 g，当归6 g，赤芍5 g，川芎3 g，地龙3 g，红花3 g，桃仁3 g(批号分别为2102003C、2102004C、2107008C、2109015C、2102001C、2103003C、2109002S)。 中药均购自湖南中医药大学第一附属医院，经湖南中医药大学刘林副教授鉴定，符合2015 年版《中国药典中药材及饮片彩色图鉴》规定[7]。 取标准中药饮片加蒸馏水6～8 倍量，分煎2 次后混匀合并，滤过，浓缩至含生药2 g/mL，4 ℃储存备用。去铁酮片(批号H20140379)，购自加拿大奥贝泰克制药有限公司 ......