勾阳阳，曾广娴，喻 嵘*，陈 聪*

    1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.黔西南州中医院，贵州 兴义 562400；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208

    非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是2 型糖尿病(type 2 diabetes, T2DM)的常见并发症之一，二者相互影响，呈恶性促进[1-3]。高糖、高脂的过度摄入，使人体的碳水化合物、脂质等物质发生代谢紊乱，是导致T2DM 合并NAFLD发病的主要原因。 中医学认为“毒损肝络”病机在T2DM 合并NAFLD 发展过程中贯穿始终。前期研究也发现，T2DM 合并NAFLD 的中医病机为气阴两虚、痰瘀互结、毒损肝络[1-2]。 现代医家普遍认为，“毒邪”泛指所有较甚的致病邪气，其中包括六淫之邪较盛或较久的外毒、 体内代谢产物蓄积蕴结而生的内毒[4-5]。 “肝络”是中医络病理论运用于内伤杂病辨治的体现，“毒损肝络”是指毒邪久伤肝络，引起肝脏出现痰凝津滞、气血瘀滞，以致气机升降失调，营卫不和，肝络失养的病变过程。 在T2DM 合并NAFLD 的发病中，“肥甘之味”被认为是损伤“肝络”的主要因素[6-8]。 根据病机，采用滋阴益气、活血解毒法治疗，发现可有效改善糖尿病MKR 鼠的血糖、血脂、肝功能[1-2]。 本课题组通过建立T2DM 合并NAFLD 的体外肝细胞损伤模型，改变肝细胞培养的微环境，模拟机体高糖、高脂环境下，肝细胞之间营养物质和代谢产物交换的过程，使其形成“毒损肝络”的状态，进一步探讨肝细胞损伤的机制，以期为中医药的治疗提供实验依据。

    1 材料

    1.1 细胞

    正常大鼠肝细胞系，购于上海中乔新舟生物科技有限公司(NO.ZQ0078)，培养基：10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、90% DMEM 培养基培养(1 mL 抗生素，含100 U/mL 青霉素及100 μg/mL 链霉素)；培养箱环境：5% CO2，37 ℃。 培养液2～3 d更换1 次，显微镜下观察细胞生长密度达85%～95%传代。 实验场地由贵州中医药大学基础医学院教学实验中心提供。

    1.2 主要试剂

    DMEM 高糖培养基(美国Hyclone 公司，批号319005121)、胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司，批号18050302)。

    1.3 主要仪器

    CO2培养箱(赛默飞世尔科技 ......