杨强健，董克芳*，王 凡，林少如，黄 勇，李 为

    1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005

    骨质疏松症是一种常见的代谢性骨病，严重危害公众的健康，其特点主要是骨量减少、微结构破坏，是老年人骨折常见的根本原因[1-2]。 骨转换失衡是骨质疏松症发病的基本病理机制之一，而导致这一病理过程的原因可能与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cel1s, BMSCs)的成骨、成脂分化能力的失衡直接相关[3]。 BMSCs 存在于许多组织中，可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞和心肌细胞等[4]。随着人们年龄的增长，机体逐渐衰老，骨重建逐渐处于负平衡状态，人体的骨骼成分丢失，从而引起骨质疏松症的发生[5]。因此，探寻促进成骨分化进而诱导衰老BMSCs 向成骨方向分化，是防治骨质疏松症的重要研究方向。 目前，在临床上治疗骨质疏松症的药物品种繁多，作用机制各异，但都存在潜在的不良反应[6-7]，中医药防治骨质疏松症有独特的优势，近年来，包括中药在内的食物疗法防治骨质疏松症开始引起人们的关注。 与传统化学合成药物相比，有着几千年用药经验的中药以不良反应较少、长期使用效果更明显等特点而得到认可[8]。 健骨二仙丸是岭南伤科萧劲夫教授针对骨质疏松症的多年临床验方，由明代王三才《医便·卷一·龟鹿二仙胶》中龟鹿二仙胶加续断、山药组成，并有研究证实，健骨二仙丸能有效促进成骨细胞分化而调控骨转化失衡[9]。 金匮肾气丸出自东汉末年张仲景《金匮要略·消渴小便不利淋病脉证并治》，六味地黄丸出自宋代钱乙所著《小儿药证直诀》，均是温肾补精的经典方剂，能有效防治骨质疏松症等疾病[10-11]。 因此，本实验采用健骨二仙丸、六味地黄丸和金匮肾气丸含药血清干预衰老BMSCs，研究3 种补肾方对衰老BMSCs 成骨分化过程中细胞形态变化和Runt 相关转录因子2(Runt-related transcription factor2, Runx2)表达的影响，以探究其防治骨质疏松症的作用机制。

    1 材料

    1.1 实验动物

    SPF 级雄性SD 大鼠40 只，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号SYXK(湘)2019-0004，鼠龄3～4 周，体质量(100±10) g，自由取食涉水，饲养在温度20～22 ℃、湿度40%～70%的环境下。实验操作均在湖南中医药大学动物实验中心完成，动物使用许可证号SYXK(湘)2019-0009 ......